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FLUORESCENCIA
TRUJILLO, 12.10.2016
QUE ES ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA?
FLUORESCENCIA
Tiene lugar por absorcin de fotones.
Es la radiacin UV/Vis que emiten los tomos,
o con ms frecuencia las molculas que se han
excitado al absorber radiacin.
Esta emisin a la que se hace referencia cesa
en 0,1s despus de que la excitacin ha
terminado.
QUE ES LA FLUORESCENCIA?
CMO SE PRODUCE LA FLUORESCENCIA?
Diagrama de Jablonski
CMO SE PRODUCE LA FLUORESCENCIA?
Diagrama de Jablonski
1) La absorcin de la luz de excitacin eleva la molcula del
fluorocromo a un estado de excitacin con un mayor contenido de
energa, S1.
2) En este estado de excitacin se mantienen un tiempo determinado,
de 10-9 a 10-8 segundos, en el cual la molcula sufre cambios
conformacionales e interacciones con las molculas de su entorno.
Como consecuencia, parte de la energa del estado S1 se disipa,
crendose un estado S1 de menor energa.
3) Pasado este tiempo de excitacin la molcula emite luz de menor
energa volviendo a su estado fundamental, S0.
FLUORESCENCIA
Localizacin subcelular
Cambios en la concentracin
Interacciones moleculares
Cambios conformacionales
Distancias intra/intermoleculares
Difusin rotacional
Caracterizacin estructural
Actividad enzimtica
INSTRUMENTOS PARA MEDIR FLUORESCENCIA Y FOSFORESCENCIA
Componentes de los instrumentos
Fuentes
Teniendo en cuenta que la magnitud de la seal de salida, y por
tanto la sensibilidad, es directamente proporcional a la potencia
de la fuente Po, normalmente se utiliza una lmpara de arco de
xenn o de mercurio.
La lmpara ms corriente para los fluormetros es la lmpara de
arco de mercurio, esta fuente produce lneas muy intensas a
254, 366, 405, 436, 546, 577, 691 y 773 nm. Las lneas
individuales se pueden aislar con los filtros de interferencia o
absorcin adecuados.
Para los espectrofluormetros, en donde se requiere una fuente
de radiacin continua, normalmente se utiliza una lmpara de
INSTRUMENTOS PARA MEDIR FLUORESCENCIA Y FOSFORESCENCIA
Componentes de los instrumentos