Benemrita Universidad Autnoma de Puebla

Facultad de Ciencias Qumicas

Lic. en Qumico Farmacobilogo EQUIPO 2:
Laboratorio de Bioqumica II Berenice Atlatenco Teomitzi
Prof. Leticia Garca Albarrn Mnica Prez De los Santos
PRACTICA 6:
AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTENAS Y RECONOCIMIENTO DE ADN
INTRODUCCIN RESULTADOS
Los cidos nucleicos son compuestos nitrogenados de elevado peso molecular que se pueden encontrar en las clulas asociados a
protenas formando complejos llamados nucleoprotenas. Estas nucleoprotenas se encuentran en tejidos abundantes en ncleos como
son leucocitos, espermatozoides, clulas hepticas, etc. Estas protenas tienen carcter bsico mientras que los cidos nucleicos son
cidos. Se conocen dos grupos de cidos nucleicos: RNA (cido ribonucleico) y el DNA (cido desoxirribonucleico). La hidrlisis
controlada de RNA y DNA produce nucletidos. Si la hidrlisis contina se producen nuclesidos y finalmente fosfatos, azcares y
bases pricas y pirimidnicas. OBJETIVOS
Los nucletidos estn formados por tres componentes caractersticos: una base nitrogenada, una pentosa y un fosfato. Aislar desoxirribonucleoprotenas a partir del hgado de
rata.
Realizar una reaccin de identificacin de DNA
Obtencin de DNA:
Estructura de un nucletido
MATERIALES: Decantacin del precipitado de nucleoprotenas,
Se empleo difenilamina como colorimtrico
obteniendo 67ml.
Una molcula sin un grupo fosfato se denomina nuclesido. Un nuclesido se forman por la unin de una base nitrogenada con un Higado de rata para observar la presencia de ADN en las
azcar (pentosa). El enlace que une ambas molculas es tipo glucosdicos (N-B-glucosidico). Mortero con pistilo REACTIVOS: Formula:
Agregar 6 ml de agua destilada por cada mililitro obtenido de sobrenadante
clulas del hgado de rata. Cuya intensidad de la
coloracin azul es proporcional a la cantidad de
Los enlaces se pueden formar del siguiente modo: caja petri NaCl 1N del precipitado.
DNA presente.
(6mlH2O) (67ml)=402ml de agua destilada
C1 de la pentosa con N9 de una base purica. Agua destilada
C1 de la pentosa con N1 de una base pirimidica. Vaso de precipitado de
500ml Reactivo difenilamina
La conexin entre las sucesivas unidades monomericas en los cidos nucleicos se realiza Vaso de precipitado de NaOH al 4%
mediante un residuo fosfato unido al hidroxilo del carbono 5 de una unidad y al hidroxilo 3 de la
250ml
DISCUSIN DE RESULTADOS
siguiente. Esto forma un enlace fosfodister entre dos residuos de azcar. De esta forma, se 1.-Se coloc el hgado en el mortero para poder romper mecnicamente las membranas de los
construyen cadenas largas de acido nucleico, que a veces contiene centenares de millones de hepatocitos, exponiendo as los ncleos para poder extraer las nucleoprotenas de estas clulas, para
unidades.
esto se agreg una solucin hipertnica NaCl, con el fin de romper los ncleos y exponer este material a
Tanto el DNA como el RNA contienen dos bases purinicas principales, la adenina (A) y la guanina
su vez se verti la mezcla en la centrifuga para as separar todos los componentes dependiendo de la
(A) y dos pirimidinas principales. Tanto el DNA como el RNA una de las pirimidinas es la citosina PROCEDIMIENTO densidad, precipitando as las nucleoprotenas.
(C) pero la segunda base pirimidinas no es la misma en las dos, timina (T) en el DNA y uracilo (U)
en el RNA. AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEINA DE REACCION DE RECONOMIENTO DE DNA
DNA 2. La difenilamina como colorimtrico se utiliza para medir la concentracin de ADN en las clulas o
Las molculas de RNA son de una sola hebra o cadena (excepto en algunos virus). Pueden contener regiones Decante el precipitado de nucleoprotenas
de doble hlice producidas por la formacin de horquillas donde se empareja A con U y G con C. Las clulas Pese 10gr. de hgado de rata.
obtenido anteriormente.
tejidos. Los reactivos utilizados en la reaccin de difenilamina incluyen cido sulfrico; la difenilamina y el
contiene tres tipos de RNA: RNAm (mensajero). Transporta la informacin gentica del DNA hacia los hidrxido de sodio. Cuando estos se calientan con el ADN se rompen los enlaces fosfodister y
ribosomas, RNAt (transferencia). Traslada a los aminocidos del citoplasma a los ribosomas y RNAr.(ribosomal). hidrolizan los enlaces glucosdicos entre el azcar y las bases purinicas. La 2-desoxirribosa sufre una
Triturarlo durante 10-15min en el mortero, agregar
Acido nucleico que asociado con las protenas conforma a los ribosomas. Adems de las bases principales poco a poco 70ml de NaCl Tome una pequea cantidad del deshidratacin lo cual lleva a la formacin de -hidroxilevulinilaldehido que en contacto con la
pueden presentar algunas bases secundarias. La secuencia de bases del RNA refleja la composicin en bases precipitado
difenilamina adquiere una coloracin azul, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de DNA
del DNA. Su funcin es mantener la informacin de la celula y regir el buen funcionamiento de las clulas. La disolucin viscosa obtenida transfirala a tubos presente.
La funcin biolgica de los cidos nucleicos es fundamental: el DNA est asociado con el material gentico de para centrifuga. Y disuelvalo en un tubo de ensaye con 1ml
las clulas, pudiendo encontrarse como una sola cadena en algunos microorganismos o formando parte de de NaOH al 4%.
nucleoprotenas de los cromosomas en organismos superiores. Almacena informacin gentica y sirve de molde Centrifugue los tubos durante 10min a 2500rpm.
para la sntesis de protenas. Se encuentra mayoritariamente en el ncleo y en muy poca cantidad en
mitocondria y cloroplastos. El RNA participa en la sntesis de protenas y se distribuye en toda la clula, Aada 1ml de reactivo difenilamina. CONCLUSIN
Decante el liquido sobre la probeta y mida el
mayormente en citoplasma en forma soluble o formando parte de los ribosomas. volumen obtenido. 1.- Se pueden aislar desoxirribonucleoprotenas a partir de hgado de rata, siendo posible
Y ponga el tubo durante 15 o 20 min en identificar al DNA mediante una reaccin colorimtrica.
En el vaso precipitado de 500ml. Agregue agua bao mara hirviendo.
destilada en una reaccin de 6 ml de agua por ml 2.- Se puede observar la presencia del ADN en contacto con la difenilamina adquiriendo una
CONCEPTOS de sobrenadante obtenido.
coloracin azul, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de DNA presente.
Vierta lentamente el sobrenadante en el agua que La presencia de una coloracin azul indica
cido nucleico: Los cidos nucleicos son grandes polmeros formados por la repeticin de monmeros denominados nucletidos, esta en el vaso de precipitado. la presencia de DNA.
unidos mediante enlaces fosfodister. Y girando lentamente con la varilla de madera trate
de enrollar los hilos de nucleoprotenas de DNA
ADN: El cido desoxirribonucleico, abreviado como ADN, es un cido nucleico que contiene instrucciones genticas usadas en el que se va precipitando.
desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisin
hereditaria. CUESTIONARIO
RNA: El cido ribonucleico (ARN o RNA) es un cido nucleico formado por una cadena de ribonucletidos. Est presente tanto en
las clulas procariotas como en las eucariotas, y es el nico material gentico de ciertos virus (virus ARN). El ARN celular es lineal y
de hebra sencilla, pero en el genoma de algunos virus es de doble hebra.
HOJAS DE SEGURIDAD 1. Escriba la estructura de los cuatro nucletidos que podemos encontrar en el DNA.
Nucleoprotenas: Son protenas compuestas constituidas de protenas como las histonas y protaminas conjugadas con cidos R.- El nucletido en el ADN consiste en un azcar (desoxirribosa), una de cuatro bases (citosina (C),
nucleicos. timina (T), adenina (A), guanina (G)), y fosfato. La citosina y la timina son bases pirimdicas o pirimidinas,
Base nitrogenada: Las bases nitrogenadas son compuestos orgnicos cclicos, que incluyen dos o ms tomos de nitrgeno. mientras que la adenina y la guanina son bases pricas o purinas. Adems de un grupo fosfato unido al
Biolgicamente existen seis bases nitrogenadas principales (en realidad hay muchas ms), que se clasifican en tres grupos, bases carbono 6 de la azcar constituyente.
isoaloxaznicas (derivadas de la estructura de la isoaloxazina), bases pricas o purinas (derivadas de la estructura de la purina) y
bases pirimidinas (derivadas de la estructura de la pirimidina).
Nucletido: Los nucletidos son molculas orgnicas formadas por la unin covalente de un monosacrido de cinco carbonos
(pentosa), una base nitrogenada y un grupo fosfato.
Nuclesido: El nuclesido es la parte del nucletido formada nicamente por la base nitrogenada y la pentosa.
Enlace fosfodister: Un enlace fosfodister es un tipo de enlace covalente que se produce entre un grupo hidroxilo (OH-) en el
carbono 3' y un grupo fosfato (PO43 ) en el carbono 5' del nucletido entrante, formndose as un doble enlace ster. 2.- Qu funcin tienen los cromosomas?
Ribosa: La ribosa es una pentosa o monosacrido de cinco tomos de carbono de alta relevancia biolgica en los seres vivos al La funcin de cromosomas es controlar todas las actividades de una clula viva. Los cromosomas son
constituir uno de los principales componentes del ARN en su forma cclica, y de otros nucletidos no nucleicos como el ATP. esenciales para el proceso de la divisin celular y son responsables de la replicacin, la divisin y la
Desoxirribosa: Es un desoxiazcar derivado de un monosacrido de cinco tomos de carbono (pentosa, de frmula emprica creacin de clulas hijas, que contienen las secuencias correctas de ADN y las protenas. Desde el color
C5H10O4), derivado de la ribosa por prdida de un tomo de oxgeno en el hidroxilo de 2', y por ello no responde a la frmula general
de los ojos hasta la textura de la cera en los odos, los cromosomas son responsables de regular todas
de los monosacridos (CH2O)n). Forma parte del ADN.
Ncleo: Orgnulo membranoso que se encuentra en el centro de las clulas eucariotas. Contiene la mayor parte del material
las funciones en nuestro organismo. Estn formados por ADN, un cdigo qumico compuesto por
gentico celular, organizado en mltiples molculas lineales de ADN de gran longitud formando complejos con una gran variedad de secuencias de bases nitrogenadas.
protenas como las histonas para formar los cromosomas.
3.- Cul es la composicin de los cromosomas?
Un cromosoma es una estructura celular que contiene el material gentico requerido por el organismo
para crecer y desarrollarse.
FUNDAMENTOS La cromatina est constituida por el ADN asociado a protenas especiales llamadas histonas, este
material es microscpico y lleva la informacin gentica a los organismos eucariotas. El ADN es uno de
1.-Una fuente importante de nucleoprotenas son los tejidos ricos en ncleos (leucocitos, espermatozoides, clulas hepticas, los cidos nucleicos que contiene la informacin gentica de las clulas e intervienen en las sntesis de
etc.). En soluciones salinas concentradas la desoxirribonucleoproteinas forman diluciones muy viscosas y se solubilizan en las protenas de las cuales dependen las caractersticas de cada ser vivo. Los cromosomas estn
soluciones salinas diluidas. Las nucleoprotenas son solubles en agua y soluciones de alta concentracin inica, pero son formados por compuestos orgnicos llamados protenas y un conjunto se macromolculas denominadas
insolubles en soluciones de baja concentracin inica (0.05- 0.25 mol/L) esta propiedad es usada en su extraccin. Las cidos nucleicos, as como segmentos de ADN llamados genes.
nucleoprotenas de DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, pero son insolubles en soluciones salinas diluidas. Al
ser precipitadas, las nucleoprotenas se sedimentan en forma de hilos. Una de las tcnicas empleadas para diferenciar
4.- Qu diferencia existe entre los nucletidos de DNA y los de RNA?
nucleoprotenas de DNA de las nucleoprotenas de RNA es la reaccin con difenilamina, que frente a las nucleoprotenas de DNA
da una coloracin azul a diferencia del color verde que da frente a las nucleoprotenas de RNA. El ARN tiene una estructura de cadena sencilla, mientras que el ADN est formado por largas cadenas
de nucletidos.
El ARN se compone de cadenas ms cortas de nucletidos.
2. Al tener las nucleoprotenas en el tubo de ensaye junto con la difenilamina y el hidrxido de sodio y someterlo a calor La columna vertebral del ADN consiste en azcar desoxirribosa, mientras que la del ARN contiene el
originamos un rompimiento del enlace fosfodister entre la pentosa y el grupo fosfato, as como tambin una reaccin de azcar ribosa.
hidrolisis entre la pentosa y las bases purinicas. La 2-desoxirribosa sufre una deshidratacin lo cual lleva a la formacin de - En el ADN, la complementaria a la adenina (A) es timina (T); mientras que en el ARN es el uracilo (U).
hidroxilevulinilaldehido que en contacto con la difenilamina adquiere una coloracin azul, cuya intensidad es proporcional a la El ADN es responsable de almacenar la composicin gentica, mientras que el ARN es responsable de
cantidad de DNA presente.
transmitir dicha composicin y ayudar a crear las protenas.

BIBLIOGRAFA
Ayudas didcticas bioqumica I. Departamento de bioqumica- alimentos. Lic. En Qumico Farmarmacobilogo (MUM) 2013.
Ayudas didcticas bioqumica II. Departamento de bioqumica-alimentos. Lic. En Qumico Farmarmacobilogo (MUM) 2015.
Nelson, David L., Cox, Michael M. Lenninger Principios de Bioqumica , 5a edicin. 2006.