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NUCLEICOS
PADILLA Yulieth; CRDENAS Roberth; QUEVEDO Hussey
Microbiologa, Biotecnologa II
2017
AMPLIFICACIN ISOTERMICA DE CIDOS
NUCLEICOS
La amplificacin isotrmica de cidos nucleicos es un proceso simple que
acumula rpida y eficientemente secuencias de cido nucleico a
temperatura constante.
Nanoestructuras de prometedores en
PROPORCIONA ACIDOS Hidrogeles de cidos
metales nucleados con biosensores, bioimgenes
NUCLEICOS nucleicos
cido nucleico nanomedicina
Amplificacin PCR- Reaccin en
Isotrmica Cadena de la Polimerasa
Cctel de reaccin entre diferen-
Temperatura constante. tes temperaturas.
Requiere de termociclador.
Rpida, y no requiere termociclador.
Calor.
Diferentes agentes de desnaturalizaci-
n. Cero tolerancia a compuestos
biolgicos.
Tolerancia a compuestos biolgicos-
Variable. Mayor tiempo de deteccin.
Tiempo de deteccin menor. Usa dos primers- 5-3.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA
AMPLIFICACIN ISOTRMICA VS PCR
Recientemente, Kaneko et al.
Una de las ventajas ms importantes de las tcnicas de
evaluaron la tolerancia de LAMP a
amplificacin isotrmica est relacionada con sus tolerancias
un medio de cultivo y algunas
con algunos materiales inhibidores que afectan la eficiencia de
sustancias biolgicas.
la PCR.
Motamedi, M., Saghafinia, M., Karami, A., & Gill, P. (2011). A review of the current isothermal amplification techniques:
Applications, advantages and disadvantages. Journal Of Global Infectious Diseases, 3(3), 293. http://dx.doi.org/10.4103/0974-
777x.83538
PRINCIPALES TCNICAS DE
AMPLIFICACIN ISOTERMICA
+10 tipos-Isothermal Amplification of Nucleic Acids
La amplificacin mediada por transcripcin La replicacin de secuencia autosostenida
(TMA). (3SR).
Vicky Trger , Katja Niemann , Cornelia Grtig y Dirk Kuhlmeier, 10 de abril de 2015
APLICACIONES
Los enfoques basados en RCA han atrado recientemente atencin de
empresas de biotecnologa orientadas al diagnstico e investigacin
centros para pruebas genticas e inmunoensayos, secuenciacin y
preparacin de plantillas, sistemas de anlisis de clulas individuales y
expresin de genes.
La RCA optimizada fue capaz de detectar 0,163 pg (~ 60 molculas) de
ADN genmico de Listeria monocytogenes o 143 zmol (8,6 x
10 4 molculas) de ARNm de CD4 humano transcrito in vitro.
Sato et al. describi un RCA en fase slida para la deteccin en
el chip de secuencias de Salmonella enterica. La Figura
9 muestra la captura y ligacin de un ADN diana especfico a 55
C. Se prehibrida una imprimacin circular con el cordn de
captura de 34 m. Despus de una etapa de ligacin, la cadena
lineal es producida por RCA. Para finalmente cuantificar el
producto, se hibrid una sonda fluorescente con el amplicn.
5 AMPLIFICACIN DEPENDIENTE DE LA HELICASA (HDA)
Yongxi Zhao*, Feng Chen, Qian Li, Lihua Wang, and Chunhai Fan*; (2015), Isothermal
Amplification of Nucleic Acids, American Chemical Society 2015, 115 (22), pp 1249112545
PRINCIPALES APLICACIONES DE LA AMPLIFICACIN ISOTRMICA
DE CIDO NUCLEICO
Yongxi Zhao*, Feng Chen, Qian Li, Lihua Wang, and Chunhai Fan*; (2015), Isothermal
Amplification of Nucleic Acids, American Chemical Society 2015, 115 (22), pp 1249112545
ARTICULO DE ESTUDIO
1 Divisin de Enfermedades Transmitidas
Emergentes y Transfusionadas, Centro de
Evaluacin e Investigacin de Biolgicos,
Administracin de Alimentos y Medicamentos,
Silver Spring, MD, EUA
2 Departamento de Biologa, Morgan State
University, Baltimore Maryland, EE. UU.
un correo electrnico: moc.rotcod@naynd
b Correo electrnico:
ude.nagrom@nosniws.nivek
QU SE HIZO EN EL ESTUDIO?
Los oligonucletidos fluorognicos especficos se hibridan solo con la secuencia diana del
ADN amplificado, dando como resultado la emisin de fluorescencia que es visible a simple
vista bajo iluminacin UV y medible con un espectroscopio de fluorescencia.
El proceso de amplificacin se lleva a cabo dentro de 30-60 minutos, utilizando una fuente de
calefaccin digital porttil.
(A) Ilustracin de las posiciones de los oligonucletidos y oligofluorforos utilizados para la deteccin de
secuencia especfica en el 5'-NCR del genoma del VHC. (B)El mecanismo biomolecular del
oligonucletido inverso de bucle bi-etiquetado (LRp) se uni covalentemente con 6-FAM como
informador en el extremo 5 'y BHQ1 como desactivador en el extremo 3'.
Deteccin de mltiplex e identificacin de virus.Los cidos nucleicos vricos de referencia
estndar se sometieron a amplificacin isotrmica mltiple para evaluar la capacidad de
deteccin del ensayo utilizando cebadores especficos de virus y oligonucletidos
fluorognicos especficos. Los objetivos detectados se identificaron mediante anlisis de
patrones de bandas.
Especificidad analtica