ENZIMAS

DEFINICIÓN DE ENZIMA
En las células vivientes la mayoría de los catalizadores son
moléculas proteicas denominadas ENZIMAS.
Formadas por:
• Apoenzima (función proteica)
• Cofactor (función no proteica)
este puede ser un Ion metálico (Fe,Mg,Zn,Ca) o una molécula
orgánica denominada coenzima
 PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

Propiedades importantes de las enzimas:

• Sumamente especificas
• Muy eficientes
• Sujetas a una gran variedad de controles
celulares
 ENZIMAS
• Catalizadores biológicos.
• Proteínas de forma globular
• Específicas para un substrato particular (Estéreo
especificidad)
• Aceleran reacciones específicas químicas(103-10 20)
• Actúan en disolución acuosa, a pH y temp. Óptimos
• Son las unidades funcionales del metabolismo celular
Reacciones acopladas (catabolismo – anabolismo)
• Reguladoras de rutas metabólicas (Oligoméricas)
Medicina Transaminasas

Industria
Química Penicilina

Fermentaciones
Transformación
Quesos
de Alimentos
Vinos

Agricultura Rhyzobium
 PROPIEDADES GENERALES
ESTRUCTURA GLOBULAR.
AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
De 106 to 1012 veces vs sin enzima.
Aún más rápido que los catalizadores químicos.
CONDICIONES DE REACCIÓN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
pH neutro (5-9), la mayoría 6.5 – 7.5
Presión atmosférica normal
CAPACIDAD DE REGULACIÓN
Por concentración de sustrato
Por concentración de enzima
Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato)
Por inhibidores no competitivos (modificación covalente de la enzima)
Por regulación alostérica
ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIÓN
Interacción estereoespecífica con el sustrato
No hay productos colaterales
ESTRUCTURA GLOBULAR
 ALTO PODER CATALITICO

• Catalizadores inorganicos. 102-103 veces

• Enzimas. 106-1020
• Ejplo.catalaza (hidratacion del CO2)– CO3NH2.
• 107 veces
 ACCIÓN A CONDICIONES AMBIENTALES
• Producción de NH3

• Fijacion biológica de nitrógeno.

– Proceso enzimatico

– Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)

– pH neutro (5-9), la mayoría 6.5 – 7.5
– Presión atmosférica normal
 ESPECIFICIDAD.
•Solo catalizan reacciones específicas.( Acción de enzimas
amilasas.)
•La región de la enzima que se une al sustrato recibe el nombre
de centro activo.
•Las enzimas poseen uno o más sitios específicos donde se une el
o los sustratos de una reacción.
•En él se encuentran los residuos catalíticos que participan en la
reacción enzimática.
 Características del centro activo

•Es una parte muy pequeña del volumen total de la

enzima.
•Tienen una estructura tridimensional en forma de hueco
que facilita encajar al sustrato.
•Están formados por aminoácidos lejanos en la secuencia
polipeptídica, que debido a los repliegues de ésta, quedan
próximos.
•Los radicales de estos aminoácidos presentan afinidad
por el sustrato, lo atraen y establecen enlaces débiles con
él.
•Esto facilita que, una vez roto alguno de sus enlaces, los
productos resultantes se puedan separar con facilidad del
centro activo.
AMINOÁCIDOS COMUNES, EN SITIOS ACTIVOS DE ENZIMAS
EN SITIOS ACTIVOS SE PUEDEN DISTINGUIR TRES TIPOS DE AMINOÁCIDOS

Aminoácidos estructurales.
• Son los más abundantes y los
responsables de la forma de la enzima.
• Por ejemplo, en la lisozima de 129
aminoácidos, 124 son estructurales y sólo
5 no lo son.

Aminoácidos de fijación.
• Son los que establecen enlaces débiles
con el sustrato y lo fijan.
• Se encuentran en el centro activo de la
enzima
Aminoácidos catalizadores.
• Son los que al establecer enlaces, con el
sustrato, provocan la reacción.
• Son los responsables de su Centro activo
transformación.
• También están en el centro activo
 MODELOS DE INTERACCIÓN (ESPECIFICIDAD)
•Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une
al centro activo del enzima: el modelo llave-cerradura, y el
modelo del ajuste inducido

Modelo de llave y cerradura.

•La estructura del sustrato y la del centro activo son
complementarias
•Este modelo es válido en muchos casos, pero no es
siempre correcto
 Modelo del ajuste inducido

• el centro activo adopta la conformación idónea sólo en

presencia del sustrato.
• La unión del sustrato al centro activo del enzima
desencadena un cambio conformacional que da lugar a
la formación del producto.
 COFACTORES Y COENZIMAS
Según su composición, las enzimas se clasifican en dos grupos:

•Enzimas holoproteínas:
Constituidos solamente por secuencias de aminoácidos.
Son poco frecuentes, pudiéndose citar como la ribonucleasa y
la lisozima.

•Enzimas heteroproteínas:
Formados por dos componentes, uno de naturaleza proteica
llamado apoenzima y otro no proteico ó grupo prostético, que
puede ser inorgánico (cofactor), o bien orgánico, en cuyo caso
se denomina coenzima.

•El conjunto de los dos componentes, apoenzima y coenzima,

forma el enzima completo que se llama holoenzima.
 Cofactores enzimáticos

Sólo proteínas

Cationes metálicos (Ca2+ Fe2+..)

Enzimas

Cofactor Coenzimas
NAD, FAD
Moléculas
orgánicas
Holoenzima
s

Apoenzima (parte proteica)

 COENZIMAS Y VITAMINAS

•Muchos coenzimas son, o provienen de sustancias

conocidas como vitaminas.

•En la actualidad está perfectamente establecida la función

coenzimática de la mayoría de las vitaminas hidrosolubles: a
excepción de la vitamina C todas forman parte de alguno de
los coenzimas conocidos.

•Por ejemplo la coenzima NAD, es una molécula derivada de

la vitamina B5 (acido nicotínico), y contribuye en la catalisis
de las reacciones de oxidoreduccion intracelulares. El acido
pantotenico es precursor de la Coenzima-A y contribuye en
la catalisis de transferencia de grupos acilo.
 S: PM 250, 0.8 nm Ø

Cofactor
E: PM 100000, 7 nm Ø
Inorgánico:
Fe2+, Mn2+, Zn2+,etc.

Orgánico:
Coenzimas
NAD,
FAD,
CoASH.
Grupo Prostético
Apoenzima Holoenzima
 Enzimas que requieren
elementos inorgánicos
Citocromo oxidasa Fe2+, Fe+,
Catalasa, peroxidasa
Citocromo oxidasa Cu2+
DNA polimerasa
Anhídrasa carbónica Zn2+
Alcohol deshidrogensa
Hexoquinasa Mg2+
Glucosa 6-fosfatasa
Arginasa Mn2+
Piruvato quinasa K+, Mg2+
Ureasa Ni2+
Nitrato reductasa Mo2+
COENZIMAS

Adenosine Triphosphate (ATP)

Coenzyme A (CoA)

Nicotinamide Adenine
Dinucleotide (NAD+) Nicotinamide Adenine Dinucleotide
Phosphate (NADP+) Flavin Adenine Dinucleotide (FAD)
 EFECTO CATALITICO DE ENZIMAS
•La acción de los
catalizadores consiste en
disminuir la Energía de
activación
•Por ej, la descomposición del
agua oxigenada (H2O2) puede
ocurrir
–sin catalizador
Ea= 18 Kcal/mol
–con un catalizador
inorgánico (platino) Ea= 12
Kcal/mol
–con una enzima específico
(catalasa) Ea= 6 Kcal/mol •La velocidad de reacción esta determinada
por el número de moléculas con energía
•Así, el platino acelera la suficiente para alcanzar el estado de
reacción 20.000 veces, transición.
mientras que la catalasa la •Mientras menor sea la energía de
acelera 370.000 veces. activación y más moléculas puedan
alcanzarla, la velocidad de la reacción será
mayor.
 NOMENCLATURA
Hay varias formas de nombrar una enzima:
• Nombres particulares
• Nombre sistemático
• Código de la comisión de enzimas

NOMBRES PARTICULARES.
• Antiguamente, los enzimas recibían nombres
particulares, asignados por su descubridor.

• Ejemplos: amilasa, pepsina, tripsina, glucoquinasa

NOMBRE SISTEMÁTICO

Consta de 3 partes:
• el sustrato preferente
• el tipo de reacción realizado
• terminación "asa“

ejemplo: la glucoquinasa
ATP: glucosa fosfo transferasa

Glc + ATP  Glc-6P + ADP

COMISIÓN DE ENZIMAS
El nombre es identificado por un código numérico:
•Encabezado por las letras EC (enzyme commission)
•Seguidas de cuatro números separados por puntos.
–el 1° número indica a cual de las seis clases pertenece la enzima,
–el 2° se refiere a distintas subclases.
–El 3°se refiere al grupo químico específico que interviene en la
reacción.
–El 4° al orden de descubrimiento.
Ej.: la ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa)
Glc + ATP  Glc-6P + ADP
EC. 2..7..1..2.
2: Transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa
COMISIÓN DE ENZIMAS CLASES DE ENZIMAS:

1. Oxidorreductasas

2. Transferasas

3. Hidrolasas

4. Liasas

5. Isomerasas

6. Ligasas
 Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreducción, es decir, transferencia de
hidrógeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, según la
reacción general:
AH2 + B A + BH2
Ared + Box Aox + Bred
Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo c oxidasa.
Enzimas:

No. Clase Tipo de reacción Ejemplo

que catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De óxido reducción Peroxidasa
(transferencia de e-) Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas

Reducción: ganancia de electrones (hidrógeno o pérdida de

oxígeno)

Oxidación: pérdida de electrones (hidrógeno o ganancia de

oxígeno).

La Oxidación y la Reducción son reacciones acopladas (REDOX)

 CLASE 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto del
hidrógeno) de un sustrato a otro, según la reacción:
A-B + C A + C-B
Ejemplo: glucoquinasa (ATP:glucosa fosfo transferasa), que cataliza
la reacción siguiente:
glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato

•grupos aldehídos
•gupos acilos
•grupos glucosilos
•grupos fosfatos (kinasas)
 Ejemplo. ATP:glucosa fosfo transferasa

En la glucólisis, esta enzima fosforila a una molécula de glucosa, a

partir de ATP, con lo cual se inicia la vía principal de metabolismo de
azúcares, para obtener energía a partir de éstos compuestos
Enzimas:
No. Clase Tipo de reacción que Ejemplo
catalizan

Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De óxido reducción (transferencia de Peroxidasa Oxidasas
e-) Oxigenasas
Reductasas

2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas

Transaminasas
 Clase 3:
HIDROLASAS

Catalizan las reacciones de hidrólisis:

A-B + H2O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reacción:
lactosa + agua glucosa + galactosa
Transforman polímeros en monómeros. Actúan sobre: enlace éster
,enlace glucosídico ,enlace peptídico ,enlace C-N
ENZIMAS:
No. Clase Tipo de reacción que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De óxido reducción (transferencia de e-) Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas

2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas

Transaminasas

Hidrólisis, con transferencia Pirofosfatasa

3 Hidrolasas de grupos funcionales del Tripsina
agua Aldolasa
 Clase 4. LIASAS
(adición o ruptura de dobles enlaces)
•Son enzimas que catalizan la ruptura de enlaces C-C, C-O, C-N y
otros enlaces por medios distintos a la hidrólisis o la oxidación.
•Requieren de la participación de un solo sustrato para efectuar
una reacción en un sentido y de dos para realizar la reacción
contraria.
•Descarboxilasas, son liasas carbono-carbono que agregan o
remueven carboxilos de diferentes compuestos orgánicos.

•Ejemplo: La piruvato
carboxilasa, que cataliza la
decarboxilación del ácido
pirúvico a acetaldehído y
dióxido de carbono
Enzimas:
No. Clase Tipo de reacción que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De óxido reducción (transferencia de e-) Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas

2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas

Transaminasas
3 Hidrolasas Hidrólisis, con transferencia de grupos Pirofosfatasa
funcionales del agua Tripsina
Aldolasa

4 Liasas Lisis de un substrato, (Sintasas)

generando un doble enlace, o
Adición de un substrato a un Descarboxilasa
doble enlace de un 2o. pirúvica
substrato
 Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversión de isómeros:
A B
Ejemplo, la gluco isomerasa que cataliza la reacción :
gliceraldehído-3-fosfato dihidroxiacetona-fosfato

La fructosa tiene capacidad edulcorante 30% mayor que la sacarosa,

2.5 veces mayor que la glucosa y es 2 veces más soluble que la glucosa
Enzimas:
No. Clase Tipo de reacción que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De óxido reducción (transferencia de e-) Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas
Transaminasas
3 Hidrolasas Hidrólisis, con transferencia de grupos Pirofosfatasa
funcionales del agua Tripsina
Aldolasa
4 Liasas Lisis de un substrato, generando un (Sintasas)
doble enlace, o Descarboxilasa
Adición de un substrato a un doble pirúvica
enlace de un 2o. substrato
(Sintasa)

5 Isomerasas Transferencia de grupos en Mutasas

el interior de las moléculas Epimerasas
para dar formas isómeras Racemasas
 Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea de un
nucleótido trifosfato (ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP A-B + XDP + Pi
Ejemplo: ADN-ligasa, que une los nucleótidos a la cadena del ADN,
con consumo de ATP. Forma enlaces covalentes entre el extremo 5’
de una cadena polinucleotídica y el extremo 3’ de otra cadena
polinucleotídica.
Enzimas:
No. Clase Tipo de reacción que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De óxido reducción (transferencia de e-) Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas
Transaminasas
3 Hidrolasas Hidrólisis, con transferencia de grupos Pirofosfatasa
funcionales del agua Tripsina
Aldolasa
4 Liasas Lisis de un substrato, generando un (Sintasas)
doble enlace, o Descarboxilasa pirúvica
Adición de un substrato a un doble
enlace de un 2o. substrato
(Sintasa)
5 Isomerasas Transferencia de grupos en el Mutasas
interior de las moléculas para Epimerasas
dar formas isómeras Racemasas
6 Ligasas Formación de enlaces C-C,
C-S, C-O y C-N. Mediante Sintetasas
reacciones de condensación,
acopladas a la ruptura del ATP
 Clases E. C. para enzimas
1. ÓXIDORREDUCTASAS
(Reacciones de oxidación-reducción)
1. Actúan sobre CH-OH
2. Actúan sobre C=O
3. Actúan sobre CH=CH
4. Actúan sobre CH-NH2
5. Actúan sobre CH-NH
6. Actúan sobre NADH o NADPH
7. Actúan sobre otros compuestos nitrogenados
8. Actúan sobre un grupo sulfuro
9. Actúan sobre un grupo hemo
10. Actúan sobre difenoles
11. Actúan sobre peróxido de hidrógeno
12. Actúan sobre hidrógeno
13. Actúan sobre donadores sencillos con incorporación de 0, (oxigenasas)
14. Actúan sobre donadores complejos con incorporación de 02
15. Actúan sobre radicales superóxido
16. Oxidan iones metálicos
17. Actúan sobre CH2
18. Actúan sobre ferredoxina reducida
19. Actúan sobre flavodoxina reducida Otras óxidorreductasas
2.TRANSFERASAS
(Transferencia de grupos 3.HIDROLASAS
funcionales) (Reacciones de hidrólisis)
1. Grupos con un carbono 1. Ésteres
2. Grupos aldehído o cetona 2. Enlaces glucosídicos
3. Grupos acilo 3. Enlaces éter
4. Grupos glicoxilo 4. Enlaces peptídicos
5. Grupos alquilo o arilo 5. Otros enlaces C-N (diferentes
6. Grupos nitrogenados del peptídico)
7. Grupos que contienen fósforo 6. Anhídridos de ácido
8. Grupos que contienen azufre 7. Enlaces C-C
8. Enlaces haluro
9. Enlaces P-N
10. Enlaces S-N
11. Enlaces C-P
4. LIASAS
(Adición a dobles enlaces) 6. LIGASAS
1. Liasas C-C (Formación de enlaces acoplados con
2. Liasas C-O la transformación de substancias como
3. Liasas C-N ATP o nucleósidos)
4. Liasas C-S  Enlaces C-O

5. Liasas C-haluro  Enlaces C-S

6. Liasas P-O  Enlaces C-N

 Enlaces C-C

5. ISOMERASAS  Enlaces éster fosfórico

1. Racemosas y epimerasas
2. Isomerasas cis-trans
3. Oxidorreductasas
intramoleculares
4. Transferasas intramoleculares
5. Liasas intramoleculares
CINÉTICA ENZIMÁTICA
 CINÉTICA ENZIMÁTICA
La velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas puede ser
modificada por la acción de diversos factores.
El comportamiento de esa velocidad y su modificación debido a la
presencia de diferentes agentes físicos o químicos constituye el objeto
de estudio de la Cinética Enzimática.

Los factores que modifican la velocidad de las reacciones

enzimaticas pueden químicos o físicos y son:
• Concentración de enzima.
• Concentración de sustrato.
• Concentración de cofactores.
• Concentración de iones Hidrogeno (pH).
• Temperatura.
• Concentración de Activadores.
• Concentración de Inhibidores.
 Concentración de Enzima
En presencia de exceso de sustrato, la actividad es proporcional
a la concentración enzimática
 Efecto de la concentración de Sustrato
A mayor concentración de sustrato mayor es la
velocidad de reacción, sin embargo los incrementos
en la velocidad no son uniformes sino cada vez
menores.

A mayor concentración de enzima (E) mayor Vo, siempre que el sustrato se encuentre en
exceso.
La primera explicación para este comportamiento fue
expuesta por la ecuación y la constante de Michaelis-
Menten. La dedujeron Leonor Michaelis y Maud Menten en el
Berlín de 1913
Según ellos la primera etapa (formación del complejo
enzima-sustrato) ocurre de manera rápida y la segunda
etapa (transformación de sustrato en producto liberando
enzima) resulta ser la mas lenta, por lo que es el paso
limitante de la reacción.
A concentraciones muy elevadas de sustrato se produce un
efecto de saturación y casi toda la enzima se encuentra
en forma de complejo enzima-sustrato. En este momento
se habrá alcanzado la mayor velocidad posible para la
reacción (Vm)
Así se obtiene la forma habitual de la ecuación de
Michaellis y Menten:
Vm (S)
Vo = -------------
Km + (S)
Donde:
• Vo= Velocidad Inicial
• Vm= Velocidad Máxima
• (S)= Sustrato
• Km= Constante de Michaellis, es un índice de la afinidad
de la enzima por el sustrato, ( a mayor afinidad por el
sustrato menor será el valor de Km ).
Concentración de sustrato
Las reacciones enzimáticas se saturan con el sustrato (son
autosaturantes)
 Efecto autosaturante
Significa que a mayor cantidad de sustrato, mayor número de
centros catalíticos estarán ocupados, lo que incrementará la
eficiencia de la reacción, hasta el momento en que todos los sitios
posibles estén ocupados.
En ese momento se habrá alcanzado el punto de saturación de la
enzima y, aunque se añada más sustrato, no aumentará más la
eficiencia

Las enzimas tienen una capacidad limite de interacción. (3 de las 6)

 Efecto de la concentración de Cofactores
• Muchas enzimas requieren para su acción de otra
molécula denominada cofactor por lo que su
presencia es decisiva para el desarrollo de la
reacción.
• Para todos los cofactores excepto para los grupos
prostéticos se presenta como para el sustrato la
condición de saturación, ya que estos se unen a la
enzima por sitios específicos.
 Efecto del pH
• Para cada enzima existe un valor de pH al cual se alcanza
la mayor Vo, denominado pH Optimo.
• Cuando los valores de pH aumentan o disminuyen con
relación al pH Optimo la velocidad de la reacción
disminuye progresivamente.
• Lo anterior se explica teniendo en cuenta que las
variaciones del pH modifican el estado de disociación de
los grupos químicos presentes en la enzima o en el
sustrato o en el Complejo enzima-sustrato, facilitando o
no la unión y/o la transformación
 Efecto del pH
• El pH óptimo de las enzimas varía ampliamente; para la pepsina,
del estómago, es de 1,5, la arginasa tiene un pH óptimo de 9,7.
• La gran mayoría de enzimas tienen un óptimo alrededor del pH
fisiológico de, ~7.0
 Enzima pH óptimo
Pepsina 1.5

Tripsina 7.7

Catalasa 7.6

Arginasa 9.7

Fumarasa 7.8

Ribonucleasa 7.8
Explicación: El sitio activo de la enzima esta frecuentemente
compuesto de grupos ionizables que deben estar en la forma iónica
para tener actividad, unir los sustratos o catalizar la reacción.
•Si varia grandemente la concentración de iones H+, la enzima se
desnaturaliza.
 Efecto de la Temperatura
• El aumento de la temperatura produce un incremento de
la energía cinética de las moléculas lo cual hace que se
produzca un mayor numero de choques efectivos entre
ellas, esto hace que los reactantes posean un contenido
energético que los ubica mas próximos al estado activado
y de esta forma se incrementa la velocidad de la
reacción.
• La mayor Vo se alcanza a un valor de temperatura
determinado, denominado Temperatura Optima, luego
del cual la velocidad comienza a disminuir y luego
desaparecer por la desnaturalización de la proteína
enzimática que provoca la perdida de su actividad
Efecto de la Temperatura
En el efecto de la temperatura
hay dos componentes:
1.Aceleración de la reacción
según la ecuación de
Arrhenius. (dentro del margen
de actividad)
k = A exp (-Ea/RT)
Para casi todas las enzimas,
un incremento de 10°C duplica
la velocidad de reacción.
2. Desnaturalización térmica de
la proteína.
Para muchas enzimas la región
de inactivación térmica está
muy próxima de la temperatura
óptima.
 Enzima Temp. Ópt.
(oC)
Mamíferos 37

Bacterias y algas aprox. 100

Bacterias Árticas aprox. 0

Bacterias en muestra de hielo antigua

 CINÉTICA DE REACCIONES CON UN SÓLO SUBSTRATO

Michaelis y Menten propusieron un modelo para relacionar la

velocidad de reacción con la concentración de substrato.
Considerando la formación de un complejo ES intermedio.
•Suponiendo la existencia de un solo complejo central, el
esquema de reacción sería:
 VELOCIDAD DE REACCION VS CONCENTRACION

La ecuación de Michaelis-
Menten describe como varía la
velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas de
acuerdo a la concentración de
sustrato:

1. Vmax = velocidad máxima teórica = la velocidad cuando todos

los centros activos están ocupados con sustrato (nunca alcanzada
en la realidad)
2, Km (constante de Michaelis-Menten para cada enzima) =
concentración de S a la que la V es 1/2 Vmax.
 CARACTERÍSTICAS DE KM:
Es una medida de la afinidad del enzima por el S.
Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad del enzima por el S.
–Una Km pequeña, refleja una gran afinidad por el sustrato, ya que
bajas concentraciones de sustrato son suficientes para saturar al 50%
de la enzima – es decir, para alcanzar ½Vmax.
–Una Km grande, refleja una baja afinidad de la enzima por su sustrato, ya
que son necesarias grandes concentraciones de sustrato para saturar el
50% de la enzima.
 KM DE ALGUNAS ENZIMAS

ENZIMA SUSTRATO Km (mM)

Catalasa H2O2 25.0

Hexoquinasa ATP 0.4
D-Glucosa 0.05
D-Fructosa 1.5
Anhidrasa carbónica HCO3- 9.0
Quimotripsina Gliciltirosinilglicina 108.0
N-Benzoiltirosinamida 2.5
-Galactosidasa D-Lactosa 4.0
Treonina deshidrogenasa L-Treonina 5.0
 Vmax
•Vmax. es la velocidad máxima teórica de la reacción.

•Se alcanzaría si todos los centros activos están ocupados.

•Para alcanzar la velocidad máxima se requiere que [S] >>

[E] y que TODAS las moléculas de enzima estén unidas al
sustrato.

•Vmax se alcanza asintóticamente a medida que la

concentración de sustrato aumenta
 LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS
ACTIVOS ESTÁN OCUPADOS CON SUSTRATO
Velocidad inicial

1/2 Vmax

Km
Concentración de sustrato [S]
 CALCULO DE Km Y Vmax POR LA
REPRESENTACIÓN DE LINEWEAVER-‐BURK
 CALCULO DE PARÁMETROS DE LA ECUACIÓN

La Linearización de
Lineweaver-Burk .
•Artificio matemático que
permite deducir gráficamente
los valores de km y Vmax.
•El artificio consiste en convertir
a la ecuación M-M en la
ecuación de una recta, de forma
Y = A + BX,
Donde:
•Y = 1/v,
•A = 1/Vm,
•B = km/Vm, y
•X = 1/[S]
 Ploteo de Eadie-Hostee
•El ploteo se realiza vi/ vi/[S], con ese fin
se multiplica ambos miembros de la
inversa de la ecuación M-M por vi.Vmax
obteniéndose:
•Vmax (vi) = Km.Vmax(vi) + Vmax(vi)[S]
• vi Vmax[S] Vmax [S]
•
• Vmax = Km.vi + vi
• [S]

•Ordenando:

• vi = Vmax - Km.vi
• [S]
•Esta es una ecuación de línea recta de la
forma Y = a – bX.

•Pendiente= –Km,
•Ordenada en el origen= Vmax.
 Ploteo de Hanes- Wolf

•[S] = Km. + [S] . 1 .

• Vi Vmax Vmax

[S]
V 1
a x
Vm

Km
V max

 [S]

0
 Ploteo Eisentahl-Cornish
• Vmax = vi + vi.Km
• [S]

V max

[S]
Km
 LIMITACIONES DE CINÉTICA MICHAELIANA
Para utilizar la ecuación de Michaelis-Menten deben asumirse:

1. La concentración de sustrato [S] es mucho mayor que la

concentración de enzima [E], de manera que la proporción de ES,
es relativamente pequeña.
2. [ES] no cambia en el tiempo (la velocidad de formación de ES,
es igual a la velocidad de su transformación en E + S y en E + P. La
reacción esta en equilibrio.
3. Deben usarse velocidades iniciales (vo). Es decir que la
velocidad de la reacción debe determinarse tan pronto como el
sustrato y la enzima se mezclan. En dicho tiempo, la
concentración de productos es despreciable, y por lo tanto, la
reacción inversa de productos a sustratos puede ser ignorada

•Existen enzimas que no siguen la cinética Michaeliana como las

enzimas alostericas
 ENZIMAS CON CINETICA NO MICHAELIANA

• Hay enzimas que no

obedecen la ecuación de
Michaelis-Menten.
• Su cinética no es
Michaeliana.
• Esto ocurre con las
llamadas enzimas
alostéricas, cuya gráfica v
contra [S] no es una
hipérbola, sino una
sigmoide (en forma de s)
 ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
•Expresa la cantidad de sustrato convertido por unidad de
tiempo, teniendo en cuenta el volumen y las condiciones
ambientales.
•En el Sistema Internacional de Unidades la unidad para la
actividad catalítica es el katal (kat), pero es una unidad
demasiado grande y suele usarse la unidad de actividad
enzimática (UI).

•1 kat = 1 mol sustrato convertido x s-1 = 6x107 UI

•1 UI = 1 μmol sustrato convertido x min-1 = 16,67 nkat

Actividad específica. Es la actividad de una enzima

por miligramo (mg) de proteína, y da una idea de la pureza de
la enzima.
•se suele expresar en: μmol x min-1 x mg-1.
Unidad de Actividad Enzimática
Es la cantidad que transforma 1.0 mM (10-6 M) de S /min a
25oC, en las condiciones de medida óptima.

La Actividad Específica
Es el no. de U de enzima / mg de proteína.
Es una medida de la pureza de la enzima.

Catalasa de Catalasa de
Aspergillius niger Hígado de bisonte
4000-8000 U/mg de prot. 2000-5000 U/mg de prot.

100 mg $ 209.80 USD. 1 g $ 768.50 USD.

El Número de Recambio de una Enzima
Es el no. de moléculas de S transformadas / unidad de tiempo,
por una molécula de enzima
(o por un sólo sitio catalítico, cuando la E, es el limitante).

Enzima. Moles de S, transf./ min.

a 20-38 ºC.

Anhidrasa carbónica 36 000 000

-Amilasa 1 000 000
-Galactosidasa 12 000
Fosfoglucomutasa 1 240
 REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
La actividad enzimática puede ser variada por la acción de
sustancias inhibidoras o activadoras.

INHIBIDOR: molécula o ion que al unirse a la enzima

produce una disminución en la velocidad de la reacción
catalizada.

ACTIVADOR: Molécula o ion que al unirse a la enzima

produce un aumento de la velocidad de la reacción
catalizada

Los inhibidores y los activadores, se usan en la formulación

de: medicamentos, antibióticos, insecticidas, herbicidas. etc
IRREVERSIBLES.
Inhibición permanente
• Unión irreversible por medio de
enlaces covalentes.
• Modificaciones químicas de los grupos
catalíticos.
• Modificada la enzima, está siempre
inhibida.
•Ejm: efecto del mercurio, plomo, gases
neurotóxicos y compuestos arsenicales.
•Ión cianuro, CN-: Se fija con gran
afinidad a la sexta posición de
coordinación del Fe hemínico del
complejo citocromo oxidasa.
•Penicilinas: Inhiben enzimas serínicas
que participan en la formación de la
pared bacteriana
INHIBIDORES
REVERSIBLES.
•La unión del inhibidor y la
enzima es reversible.
• Al quitar el inhibidor del
medio, se recupera la actividad.
Se unen a la enzima por el
mismo tipo de interacciones
que se producen entre las
enzimas y los sustratos.
hay inhibidores:
• COMPETITIVOS,
• NO COMPETITIVOS, y
ACOMPETITIVOS.
 INHIBIDORES REVERSIBLES
•Hay 3 tipos: Competitivos, No Competitivos,
Acompetitivos (Alostéricos)
Inhibidores competitivos
•Tienen gran parecido estructural con el sustrato natural.
•Compiten con el sustrato por ocupar el sitio activo de la enzima.
•Una característica de este inhibidor es revertida aumentando la
concentración de sustrato. Si éste predomina en la mezcla, tiende a
desplazar al inhibidor de su unión con la enzima.
•Ejemplo:aplicación farmacológica de las sulfamidas o sulfas.
 Ejemplo: Efecto reversible metanol/etanol
•El alcohol metílico, se produce durante la fermentacion alcohólica
del zumo de frutas con alto contenido de pectina, generando una
mezcla de etanol y metanol.
•El metanol tiene efectos tóxicos pos ingesta, por formación
metabólica de formaldehído y ácido fórmico, que son tóxicos y
ocasionan cefaleas, y hasta convulsiones, coma y muerte.
•La enzima alcohol deshidrogenasa, metaboliza al metanol y al
etanol, pero es 22 veces más afín por el etanol que por el metanol,
razón por la cual se utiliza el etanol como antídoto de esta
intoxicación, y se evita la formación de los metabolitos tóxicos del
metanol. (fuente: Llinás Chica, Vladimir)
Inhibidor competitivo
 Cinética competitiva

• Elinhibidor es una sustancia con estructura muy

similar a la del sustrato y compite con este por la
unión del centro activo de la enzima.
•En la inhibición competitiva el sustrato (s) y el i
compiten por la enzima libre, pudiendo unirse uno o
el otro, pero no ambos simultáneamente.
•La unión de E a I conduce a la formación de un
complejo no productivo.
En presencia del inhibidor aumenta la km pero no la
vm.
INHIBICIÓN COMPETITIVA
+ Inhibidor Unión del Inhibidor al
centro activo, compi6tindo
con S:
Aumenta Km.
No cambia Vmax.

Sustrato Inhibidor competitivo

 Inhibición No Competitiva
•El inhibidor se combina con la enzima o con el complejo ES,
interfiriendo con la acción de ambos.
•Se unen a la enzima en un lugar diferente del sitio activo y provocan la
distorsión del centro activo, alterando la formación de ES a su velocidad
normal y que una vez formado de lugar a la formación de P.
•No se afecta Km, Vm se afecta
•En este tipo de inhibición el inhibidor no puede ser desplazado al
aumentar la concentración de sustrato.
INHIBICIÓN NO COMPETITIVA
+ Inhibidor Unión del Inhibidor a un sitio
del enzima distinto del
centro activo: no compite
con S:

No cambia Km.
Disminuye Vmax.

Sustrato
Sustrato

Inhibidor
no
competitivo
 INHIBICIÓN ACOMPETITIVA
•Su denominación no es muy adecuada.
•El inhibidor se une solo al complejo ES para dar siempre un
complejo inactivo EIS, estabilizándolo e impidiendo la
formación de P.
•Esta forma de inhibición es poco frecuente en las reacciones
monosustrato, pero es frecuente en las reacciones con dos
sustratos.
•En este caso: Km y Vmax disminuyen.
 INHIBIDORES IRREVERSIBLES: VENENOS
•Los gases nerviosos. (sarín, tabún, somán)
•Organofosforados. El fluorofosfato de di-isopropilo DIPF
•Carbamatos.
•Inhiben la enzima acetilcolinesterasa (interviene en el
proceso de la transmisión del impulso nervioso)
•Esta enzima contiene un sitio activo con residuos de serina.
•Ejemplos de gases nerviosos: todos tienen un grupo ester
fosfato, que inactiva los restos de serina de la enzima
acetilcolinesterasa
Plaguicidas organofosforados
•Organofosforados: malathion
•Carbamatos: como el carbaril
(Sevín).

•Los organofosforados son ésteres

de fosfato con O sustituidos con S u
otros radicales.
• Con enlace P-C fosfonato,
• Con enlace P-N fosforamido,
• Con enlace P-S fosfotiolato

•Inhiben la acetilcolinesterasa
 Acción del fluorofosfato de di isopropilo DIPF

•La inhibición de la acetilcolinesterasa determina la parálisis

muscular, y el primer efecto se produce sobre los músculos
del sistema respiratorio.
•El DIPF inhibe también a otras enzimas serínicas, como
quimotripsina, tripsina, fosfoglucomutasa, etc.
 REACCIONES CON MÁS DE UN SUBSTRATO

•Algunas enzimas catalizan reacciones con dos o mas

sustratos que se influyen mutuamente, y tienen una
cinética mas compleja.
•Entre ellas están las transferasas que transfieren un
grupo especifico desde un sustrato a otro.

Mecanismos para explicar este tipo de reacciones:

a)Por formación de complejo ternario;

b) Reacciones ping-pong
a.- Reacciones mediante formación de un
complejo ternario.
El complejo ternario puede formarse independientemente del
orden de unión de los substratos (aleatorio), o bien
únicamente en un orden determinado (mecanismo ordenado).
Mecanismo aleatorio. Los substratos A y B forman un
complejo con la enzima. Cualquiera de ambos puede
combinarse con para formar el complejo ternario EAB,
que conduce a los productos X e Y y a regenerar la
enzima.
Mecanismo ordenado. Un substrato (A) se une inicialmente con la
enzima formando el complejo EA. El segundo substrato sólo se une al
complejo EA para conducir al complejo ternario EAB:

b.- Reacciones sin formación de un complejo ternario.

Ping-pong. Se forma un complejo de la enzima con un substrato
(EA), que libera el producto X, quedando como EA' (Ejplo, un acil-
enzima), el segundo substrato se une al complejo (ejemplo,
transfiriéndose el grupo acilo). EC 2.3
 ENZIMAS REGULADORES
•Todos los enzimas tienen forma de ser regulados por
factores externos: pH, [S], presencia de iones, etc.
•Los mecanismos fundamentales de regulación de la
actividad enzimática son: :

•Enzimas alostericos. Su actividad catalítica es regulada

por la unión no covalente de un metabolito específico, en
un sitio de la proteína diferente al centro activo

•Enzimas moduladas covalentemente. Se unen

covalentemente y se interconvierten en forma activa e
inactiva, por acción de otras enzimas
 REGULACIÓN ALOSTERICA
• El término alostérico proviene de las voces griegas allos que
significa otro, diferente, y estéreo que significa espacio, sitio,
lugar.
• Son proteínas oligoméricas, es decir, presentan estructura
cuaternaria.
• Existen en varios estados conformacionales interconvertibles
y con un grado variable de afinidad por sus ligandos.
• Se une por un mecanismo de reconocimiento molecular, por
lo que el sitio alostérico es un sitio de reconocimiento
molecular y la molécula que se une (ligando) se denomina en
este caso efector alostérico (se une por interacciones débiles
y por lo tanto de forma reversible).
• Los efectores alostéricos pueden aumentar la actividad de la
enzima, efectores alostéricos positivos o activadores
alostéricos, o disminuirla, efectores alostéricos negativos o
inhibidores alostéricos.
 Enzimas
alostericas
•Presentan una cinética
sigmoidal, indicativa de
efectos cooperativos en la
unión del sustrato. (No
Michaeliana)

•Su actividad está regulada

por la concentracion de sus
sustratos, por debajo de una
concentración crítica de
sustrato ([S]c) la enzima es
prácticamente inactiva
•Formas de control: control a
nivel de sustrato y feed back.
 1.- Control a nivel de sustrato
Mediante interacción de los sustratos y productos de cada
reacción con la enzima

• hexoquinasa
•Glucosa + ATP ----------> Glucosa-6-fosfato + ADP

•
•El propio producto de la reacción puede inhibir
competitivamente a la enzima

•Un ejemplo es el control de la glicolisis en la enzima

fosfofructokinasa por acción de una baja concentración
del ATP
 2.- Control por retroalimentación (Feed Back)

Un aumento de concentración del producto final de una ruta

metabólica inhibe una de las primeras reacciones de la ruta
(generalmente la primera)

Ello impide:
• La utilización innecesaria del primer sustrato
• La acumulación del producto final
• Se evita la acumulación de intermedios
 Ejemplos de cinética.
1. En una reacción enzimática que transcurre con una
concentración de enzimas de 0,015g/l, se obtienen lo siguiente:
•[S] (g/l) 20 15 10 7.0 5.0 4.0 3.0 2.5
•v(g/l-min) 1.14 1.01 0.87 0.72 0.59 0.5 0.44 0.35
•Deduzca el modelo que representa la cinética del proceso.

Representando
gráficamente se
tiene:
 Deducción de los, coeficientes de la ecuación
S v (g/l-min) 1/S 1/v

20 1.14 0.05 0.877

15 1.01 0.066 0.990

10 0.87 0.10 1.149

6.5 0.70 0.15 1.428

5.0 0.59 0.20 1.695

4.0 0.50 0.25 2.000

3.3 0.44 0.30 2.273

2.5 0.35 0.40 2.857

Gráfica Linewaber-Burk Intersección=
1/vmax=0.614
1/v
•vmax = 1.628 g/l-min.
3.0000

y = 5.3879x + 0.6147
Pendiente: Km/vmax. =
2.5000 R² = 0.9914 5.387

2.0000
•Km = 8.776 g/l
1.5000
•El modelo será.
1.0000

•V = Vmax.S/(Km+S)
0.5000

0.0000
•V = 1.628S/(8.776+S)
0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500

•Comprobar por Eadi-

Hostie
 Lienalizacion de Eadie-Hostfee
• V = Vmax – Km.V/S
v/S
0.160

0.140

0.120

0.100

0.080

0.060

y = -0.1148x + 0.1861
0.040 R² = 0.9758

0.020

0.000
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
 Ejercicio 2
Se investigó el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una
reacción catalizada enzimáticamente sobre un solo sustrato,
obteniéndose los siguientes resultados
Concentración de sustrato Concentración del inhibidor
(mmol L -1) (mmol L -1)
0 0.5 1.0
Velocidad de reacción  (mol L -1 min-1)

0.05 0.33 0.20 0.14

0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) ¿De que manera actúa el inhibidor? B) Obténgase los valores

para Vmáx, y Km.
 SOLUCIÓN A) La manera más sencilla de deducir cómo
actúa un inhibidor es graficar 1/n0 en función de 1/[S]0 para
cada concentración del inhibidor.

Gráfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la gráfica se puede observar que la pendiente de
las curvas se modifica con los cambios en la concentración
del inhibidor pero no la intersección en el eje 1/n0 (1/Vmax).
Por ello los datos anteriores indican que el inhibidor I está
actuando como un inhibidor competitivo.

B) De la intersección en el eje 1/v0 se puede estimar

Vmax= 1(mmol L -1 min-1)

De la intersección con el eje 1/[S]0 los valores:

Km=0,1 (mmol L -1) sin ihnhibidor,

Km=0,2(mmol L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor
Km=0,3 (mmol L -1) con 1(mmol L-1) de inhibidor.