Cinética Microbiana

Reproducción bacteriana
 Fisión binaria
Una célula se divide en dos después de
desarrollar una pared transversa.
Generalmente es asexual aunque en algunas
especies puede ser precedida de
conjugación.

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Fisión Binaria

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Conjugación Bacteriana
 La transferencia de material genético de una
célula a otra requiere contacto real. Se
realiza mediante la unión a través de una
fimbria sexual (“F”).

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 Las células masculinas F contienen una
pieza circular de ADN llamada factor fertilidad
o F. Las células femeninas F- carecen de este
facto y son receptoras durante la
conjugación.

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Otras formas de reproducción bacteriana:

 Esporas
 Fragmentación
 Gemación

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 Reproducción de levaduras:

Saccharomyces cerevisiae (levadura del pan) se pueden observar algunas

células gemando.
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Shirai: Tomada de:Lim, D. 1998. Microbiology. Mc Graw-Hill. Estados Unidos
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Germinación de esporas de hongos

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Crecimiento Apical:

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Crecimiento Apical:

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Crecimiento
 Se define como un incremento ordenado de los
principales constituyentes de un organismo.
 Involucra síntesis de estructuras celulares, ácidos
nucleicos, proteínas y otros componentes celulares a
partir de nutrientes.
 Todos los seres vivos toman nutrientes y excretan
productos de desecho.

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Fases de crecimiento.
 Fase lag
Es un período de adaptación, cuando un cultivo de m.o.
es llevado de un ambiente a otro.
Los m.o. sufren una reorganización tanto en su
velocidad de crecimiento como en sus constituyentes
macromoleculares.
Durante esta etapa la masa celular puede cambiar sin
cambiar el número de células.

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Fases de crecimiento.
 Fase log ó exponencial
Es un período de balance o de estado estacionario en
el crecimiento, durante el cual la velocidad específica
de crecimiento es constante.
La composición química del medio de cultivo esta
cambiando debido a que los nutrientes se están
consumiendo y productos metabólicos son
producidos.

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Fases de crecimiento.
 Fase estacionaria
Los nutrientes se agotan y productos tóxicos se
acumulan, crecimiento es más despacio con un
número de células constante.
La masa total puede permanecer constante pero el
número de células puede descender.

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Fases de crecimiento.
 Fase de decaimiento o muerte
Un gran número de células muere. Los nutrientes se
agotan y productos tóxicos se acumulan.

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Crecimiento...
 Bajo condiciones exponenciales se describe:
dX/dt=µ X….. (1)
dN/dt=µ n Ν ….. (2)
donde:
X Concentración de m.o. en g/l
N Concentración de m.o. en células/l
t Tiempo
µ Velocidad específica de crecimiento en h-1 (masa)
µ n Velocidad específica de crecimiento en h-1 (número)

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Crecimiento...
 ∫ dX/x=∫ µ dt
 Xt=X0eµ t….(3)
Xt es la concentración de m.o. en g/l en tiempo (t)
X0 es la concentración inicial de m.o. en g/l
e es la base de logaritmo natural

Si la velocidad específica de crecimiento es constante

 lnXt=lnX0+ µ t ….. (4)

La ec. 4 puede ser resuelta para el caso en el cual ∆ t=td, el tiempo

requerido para X2=2X1
 td=ln2/µ = 0.693/µ ....(5)

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La velocidad específica de crecimiento es obtenida a
partir de la pendiente de una gráfica de lnX vs tiempo

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Tiempo de generación o duplicación
 Las bacterias generalmente se reproducen por fisión
binaria.
 En este proceso una célula crece progresivamente
para posteriormente dividirse en dos células iguales.
 El tiempo requerido para que la célula se divide (o
para que la población de un organismo se duplique
en número) se conoce como tiempo de generación o
duplicación.

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Ejemplo de crecimiento exponencial
a n
Tiempo Número de 2 Población Log10Nt
n
divisiones (N02 )
0
0 0 2 =1 1 0.000
1
20 1 2 =2 2 0.301
2
40 2 2 =4 4 0.602
3
60 3 2 =8 8 0.903
4
80 4 2 =16 16 1.204
5
100 5 2 =32 32 1.505
6
120 6 2 =64 64 1.806
a
El cultivo hipotético comienza con una célula con un tiempo de
generación de 20 minutos
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 Número de generaciones
 N0=número inicial de la población
 Nt=número final de la población en un tiempo t
 n=número de generaciones en un tiempo t
 Nt= N02n
 logNt= logN0+ nlog2
 n=(logNt- logN0) /log2
 n=(logNt- logN0) /0.301

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 Constante de velocidad media del crecimiento (k)

 k es el número de generaciones por unidad de tiempo (generaciones

por hora)
 k=n/t=(logNt- logN0) /0.301t
 Si n=1, tiempo medio de generación o duplicación(g)
 Nt= 2N0
 k= (log 2N0 - logN0 )/0.301g
 k=1/g
 g=1/k

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 Descripción del crecimiento en hongos
filamentosos
Xt es la concentración
de m.o. en g/l en
tiempo (t) X max
X0 es la concentración X =
  X max - X o  
inicial de m.o. en g/l 1 +   exp - µt 
Xmax es la   Xo  
concentración
máxima de m.o. en g/l
(t→∞)
µ Velocidad específica
de crecimiento en h-1
(masa)
 Ejemplo de cinética de crecimiento con diferentes
concentraciones de sustrato (glucosa) de Aspergillus niger
Larralde-Corona et al., (1997)

Bio ma s s dry we ig ht, X (mg /c) m

2

20 120 gL -1

16 70 gL -1

12 300 gL -1

8 40 gL -1

4
10 gL -1

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Time (h)
 Ecuación de Monod
Describe la velocidad de crecimiento en relación a la
concentración de nutrientes.
µ = µ max [S/Ks+S]
donde:
µ Velocidad específica de crecimiento
µ max Velocidad máxima específica de crecimiento
S Concentración de sustrato
Ks Constante de afinidad del m.o. al sustrato

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Velocidad específica de crecimiento
µ max

0.5µ max

Ks
Concentración de Sustrato
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 Rendimiento celular
Expresa la masa celular obtenida o cantidad de producto por
unidad de masa o sustrato consumido
Yx/s = ∆ X/∆ S,
Yp/s= ∆ P/∆ S,

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Existen diferentes métodos para medir
crecimiento:
 Conteo directo al microscopio
 Método del número más probable
 Dilución en placa
 Turbidimetria
 Peso seco
 Actividad celular

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Determinación de cantidades
usando cámaras de conteo
 Se puede necesitar contar el número de
organismos en un volumen dado de líquido.
 Este tipo de conteo está asociado con
pruebas bacteriológicas o médicas.
 Existen varias cámaras diseñadas para
contar precisamente células u organismos en
condiciones diversas.
Hemocitómetro o Cámara cuenta
glóbulos
Este sistema tiene 2 áreas de conteo
separadas, cada una debe contener de 0.1
mm3 de muestra cuando se cubre con un
cubre objetos especial.
Áreas de conteo
Cubre objetos especial
 Un cubreobjetos
especial, grueso se
monta sobre dos barras
de cristal y esto forma
las dos cámaras.
Bar

Bar
Cuadrículas de conteo
Líneas finas en le piso de
la cámara ayudan con el
conteo celular.

El # células por ml =
Promedio del # de
células de los cuadros de
las esquinas x 104.
La transferencia de la suspensión
celular se hace por capilaridad
 Llene la cámara con la
suspensión celular utilizando
una pipeta con punta fina
aplicándola sobre el área
escavada de la cámara

 Deje la suspensión entrar por

capilaridad
 No ejercer presión durante el
llenado con presión
Cámara cuenta hongos de Howard
 Fue diseñada especialmente para contar
hongos y levaduras en un volumen dado de
alimento.
 La estructura es similar a la des hemocitómetro
pero no tiene cuadrícula en el piso de la
cámara.
 Un disco ocular de Howard en el ocular del
microscopio se usa para facilitar el conteo.
Cámara cuenta hongos de Howard
 Cámara de conteo de Sedgewick-
Rafter
Consiste de un marco de bronce
o poliestireno rectangular pegado
a un portaobjetos y cubierto con
otro.
Esto crea una cámara de conteo
de 1 ml.
Esta cámara es usada en
laboratorios de limnología para
contar plancton en 1 ml de
muestra de agua.
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Tiempo de generación o duplicación
 Tdpromedio en bacterias:
15-20’ o bien de 45-60’.
 Tdpromedio en levaduras:
90-120’.
 Tdpromedio en hongos:
60-90’ o bien de 4-8 horas.

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 Crecimiento críptico
Se puede observar durante la fase estacionaria, en la
que se produce un medio complejo debido a lisis
celular a partir de la cual los m.o. pueden crecer
como en etapa exponencial.

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 Crecimiento sincronizado
Son poblaciones de células que están en la misma
etapa de crecimiento. Se pierde la sincronía debido a
que las diferentes poblaciones no envejecen igual.
El crecimiento sincronizado puede ser obtenido
mediante la alteración del ambiente (temperatura,o
nutrientes). Por ejemplo: Baja temperatura a que los
m.o. aumentan su talla pero no hay división, para
después incrementar temperatura a la optima.

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 Un quimostato permite mantener
la población microbiana
constante.
Consiste de un reservorio con
medio estéril un regulador de flujo
que controla la adición de medio
fresco al cultivo. El reservorio del
cultivo a su vez tiene paso a otro
recipiente que colecta el medio
agotado.

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