NUTRICIÓN MICROBIANA Y

MEDIOS DE CULTIVO
GABRIELA MENDEZ
 DEFINICIONES

Cultivo bacteriano:
método proliferación Macronutrientes:
de microorganismos captados en
en un sustrato cantidades
adecuado. grandes.

Nutrientes:
productos químicos Micronutrientes:
requeridas para la requieren en
síntesis de material
celular y generación
cantidades
de energía. pequeñas
 REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES

Fuentes de carbono Fuentes de nitrógeno

• Aminoácidos
• Ácidos grasos
• Ácidos orgánicos
• Azucares
• Bases nitrogenadas
• Compuestos aromáticos.
• Amoniaco
• Nitrato
• Compuestos orgánicos (aminoácidos,
bases nitrogenadas de nucleótidos)
• N gaseoso: bacterias fijadoras de
nitrógeno.
 REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES

• Minerales: S, P, Ca, Mg, K, Na, Fe.

• Elementos traza (cobalto, níquel, cromo, cobre, manganeso, selenio, vanadio, zinc) - enzimas y cofactores
 REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES

Factores de crecimiento

Cualquier compuesto que no

puede ser sintetizado de fuentes
de carbono simples.
Vitaminas: coenzimas

Aminoácidos: síntesis
proteínas

Purinas y pirimidinas:
síntesis ácidos nucleicos
MEDIOS DE CULTIVO
 FACTORES AMBIENTALES

Temperatura pH
• Mohos y levaduras
- Mohos y > 5.5-6.0 (Acido
levaduras: 25°C láctico)
- Bacterias: 35- • Bacterias:7.0-7.4
37°C.

37°C
-Anaerobios
estrictos
- Aerobios
Nivel de oxigeno
estrictos
- Anaerobios
facultativos
 MEDIOS DE CULTIVO Preparación liquida o solida, utilizada para el
crecimiento y mantenimiento de microorganismos.

Proveer nutrientes necesarios.

Balance de nutrientes
Apropiada concentración.

Muchos nutrientes se convierten en inhibitorios a

concentraciones muy altas.

Optimizar el crecimiento del organismo de

interés.

Habitad natural
“Se pueden cultivar 14-55%
bacterias heterotrofas de
un lecho marino”
High recovery of culturable bacteria from the surfaces of
marine algae
PR Jensen, CA Kauffman, W Fenical - Marine Biology, 1996 - Springer
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES

E.COLI TREPONEMA PALLIDUM

 CONSTITUYENTES PRINCIPALES
Fuente de N: aminoácidos, peptonas y extractos.

Fuente de C: peptonas, azucares.

Buffer: buffer de fosfato, Tris.

Sales minerales y metales

Factores de crecimiento: sangre, suero, extracto de levadura, vitaminas.

Cloruro de sodio: balance osmótico

Agente gelificante: silica gel, alginato, gelatina.

Agentes selectivos: inhiben microorganismos acompañantes.

Indicadores
 CONSTITUYENTES PRINCIPALES

Agentes gelificantes:
• Agar: galactosa, y ácido glucorónico. Algas rojas. Solidifica a 40-42 C
• Silica gel
• Alginatos. Excelentes para cultivo de células en suspensión.
• Gelatina
• Fitagel. Conocido también con el nombre gelrita, marca registrada de Merck; es
de amplio uso.
• Ficoll. Es un derivado de polisacáridos que produce medios de cultivo de tipo
coloidal.
 CLASIFICACIÓN Todos sus componentes son conocidos

MEDIOS DE CULTIVO
Quimioorganotrofos heterótrofos (glucosa y amonio)

Tipos generales de medios de cultivo son: Docenas de compuestos.

- Medios de cultivo químicamente definidos Investigación porque se desea conocer que esta
metabolizando el microorganismo de interés
o medios sintéticos.
- Medios de cultivo complejos: caldo nutritivo,
McConkey agar.
Cuando
Medio que contiene
requerimientos
algunos ingredientes Son muy ricos en
nutricionales de un
de desconocida nutrientes.
microorganismo son
composición.
desconocidos.

Pectonas, extracto
Bacterias fastidiosas
de carne o levadura.
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Medios complejos:
• Peptonas: hidrolizados de proteínas por digestión proteolítica de carne, casina carne de
soya, gelatina, etc.
• Extracto de carne y extracto de levadura: extractos acuosos de carne de res magra y
levadura de la cerveza.
• Extracto de carne: aminoácidos, péptidos, nucleótidos, ácidos orgánicos, vitaminas y
minerales.
• Extracto de levadura: nitrógeno y carbono.
 CLASIFICACIÓN MEDIOS DE CULTIVO

Se clasifican por:
• Consistencia
• Selectividad de crecimiento
 CONSISTENCIA

• Liquido: por ejemplo el caldo nutritivo, Infusión Cerebro Corazón (BHI), agua de peptona.
 CONSISTENCIA

Semi-solido Solido

• Agar: 0.7% • Agar: 1.5%

• Ejemplo: SIM • Ejemplo: Agar
Sangre, Agar
McConkey,
TSI.
SELECTIVIDAD DE CRECIMIENTO

Enriquecimiento: son medios complejos que permiten la proliferación de muchas especies de

bacterias.
SELECTIVIDAD DE CRECIMIENTO

Selectivos: designados para estimular el crecimiento de cierto tipos de microorganismos, mientras

inhibe el crecimiento de otros.

Sales biliares Se usa para seleccionar

microorganismos incapaces de
pasar por el intestino,
especialmente gram positivos.
Verde brillante, Cristal Inhibe gram positivos
Violeta, Fuscina
ADITIVOS

Antibióticos antibacterianos:
adicionan en medios de cultivo
para hongos.

Cloranfenicol o
tetraciclinas.

Polimixina-B: inhibe el
crecimiento de la flora
secundaria. Gram-
 SELECTIVIDAD DE CRECIMIENTO

Diferenciales: identificación de diferentes grupos de bacterias de acuerdo a sus

propiedades metabólicas.

Lactosa Se usa con el carbohidrato Indicadores de pH

fermentable en el medio
que diferencia entre Rojo fenol
Coliformes y no Coliformes amarillo (pH acido) y
Ion férrico Se usa como un indicador de rosado (pH alcalino).
reducción de sulfuro. Al
reaccionar con H2S, y formar un
precipitado negro.
SELECTIVIDAD DE CRECIMIENTO

Medios especificos:
diseñados para el
Ejemplo: Medio TCBS para
aislamiento e identificación
Vibrio cholerae.
de microorganismos
específicos.
EJEMPLOS MEDIOS DE CULTIVOS
AGAR NUTRITIVO
Extracto de
levadura

Cloruro de
Peptona
sodio

Extracto de
carne
 MKL (McConkey Lactosa Agar)

Enterobacteriaceae:
fermentación de la
lactosa.

Cristal
violeta
Rojo neutro: decolora
en pH sobre 6.8 y se
Sales torna rosado a un pH
biliares bajo el 6.8.
 ASH (Agar sangre humana)

Sangre
(eritrocitos)
MANITOL SALADO

• Aislamiento y diferenciación de
Staphylococcus
Diferencial
• Manitol: amarillo
Selectivo
• 7.5% NaCl
• Rojo fenol: amarillo bajo el pH 6.8 y rojo a
pH 7.4 a 8.4
Diferencial
 MEDIO TCBS (AGAR TIOSULFATO
CITRATO BILIS SACAROSA)

Medio TCBS para Vibrio Tiosulfato, citrato, alcalinidad elevada: inhibe

cholerae. Enterobacteriaceae.

Azul de bromotimol: cambia a amarillo (sucrosa).

Bilis y colato: Enterococci

MEDIOS DE CULTIVO PARA HONGOS

20 a 24 C
MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS LISTOS PARA
USAR
• PLACAS PETRIFILM
 CONCLUSIONES

• Los compuestos químicos presentes en las células se forman a partir de materiales

disponibles como nutrientes en el medio exterior.
• Macronutrientes: elementos requeridos en grandes cantidades.
• Micronutrientes: elementos requeridos en pequeñas cantidades.
• Medios de cultivo proporcionan los requerimientos nutricionales de los microorganismos.
Clasificación de los medios de cultivo
• Selectividad de crecimiento: enriquecidos, diferenciales, selectivos.
• Consistencia: líquidos, solidos y semi-solidos
LIBROS DE REFERENCIA

• Fritz. H, et al (2005). Medical Microbiology. Stuttgart-New York.Thiem. 10th edition.

• Leboffe, M and Pierce, B (2011). A Photographic Atlas for the Microbiology Laboratory. Englewood-
Colorado. Morton Publishing. 4th edition.
• Merck. (2002). Microbiology Manual. Europa: Merck. 2th Edition.
• Murray. P, et al. (2005). Microbiología Medica. Madrid-España. ELSEVIER, 5th edición.