Biología Molecular

y Celular en
Ortopedia
ASESOR:
DR. CARLOS ACOSTA

RII JAVIER ALEJANDRO GUERRA GARZA

 Las investigaciones sobre la función del ADN y el ARN con
tecnología moderna han revolucionado las ciencias biológicas y la
biomédica.

 El entendimiento sobre la estructura y la función de los genes ha

contribuido a la identificación de múltiples causas de
enfermedades

 El uso de DNA Recombinante ha llevado al diagnostico de muchas

enfermedades, así como nuevos acercamientos terapéuticos
además ha abierto el camino para ingeniería de tejidos, tejidos
alterados genéticamente y terapias genéticas.
Cromosomas

En los humanos existen 46 cromosomas, divididos en 23 pares

-22 pares son autosomas

-1 par es sexual

Se encuentran en el núcleo de la célula

Contienen ambos:
Acido desoxirribonucleico (ADN) y Acido ribonucleico (ARN)
ADN

 Regula la función celular a través de la síntesis de las proteínas

 Se ha descrito clásicamente como una doble hélice que
contiene una molécula de azúcar respectivamente, cada una
de las cuales posee una base nitrogenada (adenina, guanina,
citosina, timina) la cual se une con las base nitrogenada de la
otra hélice a través de puentes de hidrogeno, lo que conforma el
nucleótido.

 En el ADN las bases nitrogenadas tienen una unión predetermina:

Adenina – Timina
Citosina – Guanina
Factores de Transcripción
 Existen múltiples formas de regular el nivel de expresión de un
determinado gen

 El fenotipo es determinado por el espectro de proteínas expresadas

y la cantidad de su síntesis

 Se considera que tan solo 5,000 genes de los mas de 80,000 genes
que compone el genoma humano son activamente expresados
debido a esto el control de expresión es un determinante
importante de la función biológica.
 Los genes están organizados en regiones codificantes o exones, los
cuales contienen la secuencia de mRNA; los intrones por otro lado
son secuencias no codificantes.

 La creación de mRNA requiere el corte y empalme de los exones

durante la transcripción en el núcleo. Algunos tipos de intrones
contienen ribosomas con actividad catalítica y son separados
durante la transcripción, otros intrones requieren de una actividad
catalítica externa.
 ´5 ´3

 La unión de los intrones/exones es definida por secuencias. Los

intrones inician en la secuencia GT ´5 y termina en la secuencia AG
´3, el cual define la dirección del corte y empalme. Los snRNA son
los encargados de realizar este proceso

 Muchos genes pasan por modificaciones alternativas (corte y

empalmes) de exones los cuales permiten crear diferentes
proteínas de un mismo gen.

 La inclusión y exclusión de diferentes exones, además de la forma

de empalmarse determinaran la forma final de la proteína.
Factores de Crecimiento
Proteínas secretadas por muchos tipos de células que se unen a
receptores específicos y mediante eventos de señalización modulan la
proliferación y diferenciación celular.

Esencialmente todo tejido musculo esquelético produce y responde a los

factores de crecimiento los cuales participan durante las enfermedades,
lesiones así como procesos de reparación y crecimiento normal.

Recientemente se han empezado a utilizar con aplicaciones terapéuticas

al descubrirse que mutaciones en estos factores de crecimiento se
asocian con degeneración de crecimiento celular así como ciertos
canceres y/o malformaciones esqueléticas.
Factores de Crecimiento
 Factor de crecimiento transformante
 Proteínas morfogenéticas de hueso
 Factor de crecimiento parecido a la insulina
 Factor de crecimiento fibroblastico
 Factor de crecimiento vascular endotelial
 Proteínas WNT
 Proteína relacionada a hormona paratiroidea
 Factor de crecimiento transformante
 Proteínas morfogenéticas de hueso
 Factor de crecimiento parecido a la insulina
 Factor de crecimiento fibroblastico
 Factor de crecimiento vascular endotelial
 Proteínas WNT
 Proteína relacionada a hormona paratiroidea
Factor de crecimiento
transformante
 El TGF-b es una familia de factores de crecimiento dimericos
compuesta de cinco formas primarias.

 En general estimula la proliferación de células de origen

mesénquimal. Son secretadas como propéptidos latentes los cuales
requieren una unión enzimática para su activación o un ambiente
pH acido.

 Se han identificado tres receptores en cartílago(tipo I, II, III) siendo el

tipo II el cual inhibe la proliferación y de condrocitos pero
llevándolos a su maduración.
 La cascada de señalizaciones en respuesta al TGF-b todavía no
están completamente entendibles. Lo que se conoce es que
estimulan la síntesis de proteoglicanos y tienen efectos reversos
sobre ciertas citosinas que estimulan la degradación de matriz
extracelular confirmando así que este es necesario para el
funcionamiento normal de un condrocito articular.
 Factor de crecimiento transformante
 Proteínas morfogenéticas de hueso
 Factor de crecimiento parecido a la insulina
 Factor de crecimiento fibroblastico
 Factor de crecimiento vascular endotelial
 Proteínas WNT
 Proteína relacionada a hormona paratiroidea
Proteínas morfogenéticas de hueso
(BMPs)
 Las BMPs son una subfamilia de TGF-b que están envueltos en la
regulación de crecimiento y desarrollo a diferencia del TGF-b no
requiere de una proteólisis para su activación.

 La gran mayoría de los BMPs comparten la capacidad de inducir la

diferenciación de cartílago y hueso a través de la calcificación
endocondrial.

 Los BMPs en particular el BMP-2 y el BMP-7 son usados en

experimentos clínicos para inducir la regeneración de hueso. Se ha
demostrado en modelos animales su eficacia en la estimulación de
defectos críticos y no uniones.
 Factor de crecimiento transformante
 Proteínas morfogenéticas de hueso
 Factor de crecimiento parecido a la insulina
 Factor de crecimiento fibroblastico
 Factor de crecimiento vascular endotelial
 Proteínas WNT
 Proteína relacionada a hormona paratiroidea
Factor de crecimiento parecido a
la insulina
 IGF-1 también conocida como somatomedina C, es producida en el
hígado como en el esqueleto en respuesta a la hormona de
crecimiento. Esta estimula la proliferación de condrocitos y contribuye
significativamente al crecimiento de los huesos largos.

 Otra de sus funciones es la estimulación en la síntesis de proteoglicanos

así como la proliferación celular

 La IGF-2 es expresada por hueso y esta estimula la proliferación y

síntesis de matriz extracelular por osteoblastos.
 Factor de crecimiento transformante
 Proteínas morfogenéticas de hueso
 Factor de crecimiento parecido a la insulina
 Factor de crecimiento fibroblastico
 Factor de crecimiento vascular endotelial
 Proteínas WNT
 Proteína relacionada a hormona paratiroidea
Factor de crecimiento fibroblastico

 Los FGFs son una familia de once factores de crecimiento siendo los
mas abundantes los FGF-1 y FGF-2. estos son encontrados en la
matriz de cartílago y de hueso además de que estimulan la
proliferación de ambos tipos celulares.

 Mutaciones en el receptor de FGF se han visto implicados en

múltiples condrodisplasias humanas. Los FGFs tienen función
angiogenica, se ha usado FGF-2 experimentalmente en pacientes
con áreas infartadas de miocardio teniendo un buen resultado.

 Los FGFs se han usado en estudios para estimulación de la

reparación de tendón, ligamento y cartílago.
 Factor de crecimiento transformante
 Proteínas morfogenéticas de hueso
 Factor de crecimiento parecido a la insulina
 Factor de crecimiento fibroblastico
 Factor de crecimiento vascular endotelial
 Proteínas WNT
 Proteína relacionada a hormona paratiroidea
Factor de crecimiento vascular
endotelial
 Como su nombre lo indica es un factor de crecimiento que estimula
la proliferación de células endoteliales formando nueva
vasculatura.

 El VEGF esta envuelto en la angiogénesis para la reparación de

hueso así como tumores malignos. Este se ha utilizado en pruebas
medicas mejorando la isquemia en extremidades inferiores así
como en la revascularización del miocardio.
 Factor de crecimiento transformante
 Proteínas morfogenéticas de hueso
 Factor de crecimiento parecido a la insulina
 Factor de crecimiento fibroblastico
 Factor de crecimiento vascular endotelial
 Proteínas WNT
 Proteína relacionada a hormona paratiroidea
Proteínas Wnt

 Las proteínas Wnt consisten en un numero pequeño de

glicoproteínas ricas en cisteína envueltas en la regulación de la
actividad celular y desarrollo temprano.
 Factor de crecimiento transformante
 Proteínas morfogenéticas de hueso
 Factor de crecimiento parecido a la insulina
 Factor de crecimiento fibroblastico
 Factor de crecimiento vascular endotelial
 Proteínas WNT
 Proteína relacionada a la hormona paratiroidea
Proteína relacionada a la hormona
paratiroidea y Indian Hedgehog
 La PTHrP es un factor local mas que una hormona sistémica a
diferencia de la PTH. Fue inicialmente identificada en tumores
malignos que producían hipercalcemia.

 El efecto de la PTHrp en condrocitos es estimular su proliferación y

suprimir los genes asociados con su maduración.
 CARACTERISTICAS
Factor de crecimiento Estimula la proliferación de
transformante células de origen
mesénquimal
Proteínas Induce la diferenciación de
morfogenéticas de cartílago y hueso a través
hueso de la de osificación
endocondral
Factor de crecimiento Estimula la producción de
parecido a la insulina condrocitos además de el
crecimiento de huesos
largos
Factor de crecimiento Estimula la producción de
fibroblastico hueso y cartílago
Factor de crecimiento Estimula la proliferación de
vascular endotelial células endoteliales
(formación de nueva
vasculatura)
Proteínas WNT Juegan un papel
importante durante el
desarrollo temprano
Proteína relacionada a Esta relacionada con el
hormona paratiroidea desarrollo de cartílago de
crecimiento
Estimula la síntesis de
proteoglicanos
Induce la diferenciación
condrogenica de células
mesénquimales
IGF-1 en cartílago, estimula
la síntesis de proteoglicanos
así como la proliferación
celular
Estimula el crecimiento de
la vasculatura
(angiogenica)
Estimula la proliferación de
condrocitos y suprime su
maduración
Estimula la reparación de
cartílago, así como la
reparación de hueso
Promueve la maduración
de cartílago e induce la
regeneración de hueso
IGF-II en hueso, estimula la
proliferación y síntesis de
matriz extracelular por
osteoblastos
Se usa en combinación con
IGF y TGF para la
estimulación en la
reparación de ligamentos,
tendones y cartílago
 Expresión de fenotipo celular

 El genotipo de un organismo o una célula se refiere a los genes

presentes en su genoma, pero en cualquier célula somática
solo una fracción de los genes son expresados y este perfil de
expresión es usualmente regulado por interacciones
especificas.

 En pocas palabras el fenotipo de una célula es definido por el

conjunto de genes que son expresados y el relativo nivel de
expresión.

 Cuando el fenotipo de una célula es caracterizado el centro

de importancia tiende a estar en los genes expresados que son
únicos a ese tipo celular.
 La diferenciación celular se refiere a la adquisición de un perfil
especifico en expresión de genes que separan esta célula de otro
tipo celular.

 La proliferación celular esta inversamente regulada por la

diferenciación celular. La proliferación de células normales es
prevenida por contacto celula-celula.
 Cuando se encuentra un numero disminuido de células inicia una
proliferación, durante esta la expresión especifica de proteínas del tejido
disminuye. Cuando estas llegan a cierta cantidad se disminuye su
proliferación, retomando otra vez la expresión de proteínas.

 Las células del tejido musculoesqueletico (musculo, tendón, ligamento,

hueso, cartílago y tejido conectivo) derivan de las células multipotenciales
llamadas células madre mesénquimales. Estas disminuyen con la edad así
como su respuesta a los factores de crecimiento
 Fenotipo Osteoblastico
 Producen y secretan proteínas estructurales (colágena) y
reguladores (factores de crecimiento).

 La matriz extracelular producida recibe el nombre de ostioide,

que al ser mineralizada con hidroxiapatita cristalina se convierte
en hueso.
 La proteína mas abundante (90%) de esta matriz es la colágena
tipo I. las fibrillas de colágeno se establecen paralelo a la
superficie del osteoblasto, espontáneamente nucleando cristales
de hidroxiapatita lo cual sucede en la “zonas de agujero”.

 Al pasar el tiempo estas fibrillas cambian de orientación 90° en

referencia a la anterior capa resultando en una estructura
encapa como madera contrachapada la cual maximiza la fuerza
tensil.
 Durante la diferenciación de los osteoblastos suceden los siguientes
cambios:
-Cambio de la producción de colágena III y I a predominantemente tipo I

-Aumenta la producción de fosfatasa alcalina

-Aumenta la expresión de osteonectina, osteocalcina, osteopontina y

sialoproteinas

-Presentan un gran numero de procesos celulares que se extienden

atraves de la matriz celular para comunicarse con otros osteocitos
llamados canaliculi.
Fenotipo Condrocitico

 Los condrocitos se caracterizan por la producción de una

abundante matriz extracelular. Estos pueden ir por dos caminos:
1 Maduración, hipertrofia y calcificación de la matriz extracelular
(Calcificación endocondral)
2 Relativamente inactivas, realizando funciones de soporte de carga y
estructurales

La proteína predominante de la matriz extracelular es la colágena II

Los proteoglicanos (agrecan) confieren muchas de las características
mecánicas únicas del cartílago incluido la habilidad para absorber la
compresión repetitiva de carga mecánica sin daño.
 Fenotipo Osteoclastico
 Son los encargados de llevar la reabsorción de hueso. Son células
altamente especializadas. Están unidos a la superficie del hueso a través
de una proteína llamada integrina.

 A través de una serie de invaginaciones plasmáticas de los osteoclastos

están en contacto con la matriz extracelular; (aumentando la área de
superficie)
 Una bomba de protones acidifica la superficie disolviendo la
hidroxiapatita de la fase mineral de hueso. Además de que los
lisosomas sueltan su contenido (enzimas catalíticas) a la superficie
los cuales degradan la colágena

 Su vida es corta con un estimado de 10 a 14 días, después sufren

apoptosis
Fenotipo Fibroblastico
 Una de las características principales es la síntesis de colágeno I y III

 Estas pueden especializarse en células de tendón y ligamento, los

cuales están compuestos principalmente por colágena I y XII

 Las células parecidas a fibroblastos de tendón y ligamentos responden

a estrés mecánico, los cuales controlan la reorganización de matriz
extracelular disminuyendo la colágena III para aumentar la de la
colágena I y permitiendo la alineación de las fibrillas.

 La fuerza y velocidad de remodelación durante la reparación de

tendones y/o ligamentos es aumentada con la aplicación de fuerzas
tensiles.
 Características

Fenotipos
Osteoblastico Producen y Colágena Tipo I Osteonectina,
secretan proteínas Fosfatasa alcalina Osteocalcina,
estructurales y Osteopontina
reguladores
Condrocitico Producción Colágena tipo II Agrecan
abundante de
matriz extracelular

Osteoclastico Reabsorción de
hueso,
degradación de
matriz extracelular
Fibroblastico Produccion de Colagena I y III fibronectina
proteínas
estructurales,
diferenciarse en
células de tendón
o ligamentos
Neoplasia

Los genes los cuales al perder su función estos permiten la

transformación maligna de las células reciben el nombre de
“Oncogenes”
 Protoncogenes son encargados de la proliferación celular, que al
sufrir mutaciones desencadenan una perdida en el control de
crecimiento
erbB1, c-myc, brca-1, brca-2, l-myc, ras
 Antioncogenes son encargados de la supresión de tumores
previniendo la proliferación de células
RB, APC, p53, NF, WT
 Muchas células poseen mecanismos de desintoxicación
bombeando activamente las moléculas afuera de la
célula.

 Es por eso que muchos agentes quimioterapéuticos son

extraídos de las células explicando así la falta de
sensibilidad de ciertos canceres para la quimioterapia
Metástasis
 La característica principal que caracteriza la malignización de un
tumor es la capacidad de migrar a otros órganos

 Es un proceso extremadamente complejo:

1 Motilidad celular
2 Invasión de tejidos normales
3 Transgresión de endotelio (Intravasación)
4 Unión al endotelio en un lugar distante
5 Transgresión del endotelio (Extravasación)
6 Invasión local del órgano
7 Establece la colonización y proliferación
8 Inducir la angiogénesis local
9 Posiblemente repetir el ciclo de metástasis
 Existe una selectividad de
ciertos tipos de canceres a
ciertos tipos de órganos.

 Los patrones clínicos de

metástasis son específicos para
diferentes tipos de tumores
teniendo predilección para
localizaciones especificas
 Citosinas

 Son un grupo diverso de péptidos solubles para la señalización de

moléculas; se han identificado mas de cien moléculas.

 Aunque las citosinas son bien conocidas por su rol en la inflamación

tienen otros efectos como en la reparación y hemostasia de tejidos.
Son producidas típicamente de forma local para actuar de una
forma paracina o autocrina; además tienen efectos sistémicos que
van desde fiebre hasta caquexia.

 Estas moléculas tienen la función de mejorar y amplificar la

respuesta inflamatoria así como su regulación.
Inmunobiología

 El sistema inmune provee la defensa contra patógenos extraños.

 En la cúspide del sistema inmune se encuentra la célula presentadora de

antígenos, la cual fagocita el antígeno para su después presentación a
los linfocitos T CD4 con la ayuda del Complejo Mayor de
Histocompatibilidad (CMH II)

 Los linfocitos CD4 determinan si el antígeno es “propio” (en cuyo caso no

hay activación del sistema inmune) o “no propio” atraves del complejo
receptor CD3.
 Al activarse el sistema inmune resulta en una expansión y estimulación
de CD4 y CD8.

 Aunque los linfocitos B tienen la capacidad para responder a

antígenos exógenos directamente también pueden diferenciarse en
células plasmáticas y producir inmunoglobulinas

 Una respuesta inflamatoria puede desarrollarse en ausencia de

activación inmunológica. (aflojamiento aséptico de implante)

 La fagocitosis de ciertas partículas del material resulta en la secreción

de citosinas (TNF-a, IL-1, IL-6) con el subsecuente desarrollo de fibrosis
sin evidencia de respuesta inmunológica