Técnicas de análisis

microbiológico del
agua
Acosta Ovando Clarissa Fabiola 2153060927
De La Fuente Vázquez Michelle 2152043397
Noguerón Olmos Karen Mireya 2152031360
Marín González Patricia 2142034493
2
 AGUA
El agua, además de ser una Frecuentemente actúa como
sustancia imprescindible vehículo de transmisión de
para la vida, es ampliamente microorganismos entéricos.
utilizada en diversas El principal origen de estos
actividades como microorganismos patógenos
agricultura, industria son las heces humanas. El
(cosmética y alimentaria, abastecimiento de agua para
farmacéutica, etc) uso uso y consumo humano con
doméstico, entre otros. calidad adecuada es
fundamental para evitar y
prevenir enfermedades
gastrointestinales y otras.
El agua es de los recursos más apreciados en el planeta.
En México la NOM-127-SSA1-1994
establece los límites de calidad
bacteriológicas permisibles y los
tratamientos de potabilización del
agua para uso y consumo humano.

Agua para uso y consumo humano:

aquella que no contiene contaminantes ,
ya sean químicos o agentes infecciosos y
que no causen efectos nocivos al ser
humano.
 6

USOS EN LA INDUSTRIA FARMACEÚTICA

⊗ Lavado de equipos
⊗ Limpieza de áreas
⊗ Disolvente o ingrediente para la
fabricación de medicamentos
⊗ Lavado de envases
 8

AGUA POTABLE
Debe cumplir con los requisitos de versión vigente de la NOM-
127-SSA1-1994, salud ambiental, agua para consumo
humano, “Límites permisibles de calidad y tratamientos a que
debe someterse el agua para su potabilización.”

⊗ Límites permisibles de características fisicoquímicas del

agua (olor, color, sabor, dureza, pH, etc)
⊗ Límites permisibles de características bacteriológicas
(organismos coliformes totales y fecales)
Técnica por filtración por membrana,
reportar como: UFC/100 mL

Técnica del Número más

probable, reportar como:
NPM/100mL
¿Para qué se hacen los
análisis de agua?
⊗ Evaluar la calidad de las
aguas
⊗ Detectar la presencia de
microorganismos en las
aguas para usos especiales
como las utilizadas en la
industria farmacéuticas
⊗ Precisar la presencia de
metabolitos microbianos
Factores que afectan el
crecimiento microbiano
Intrínsecos

⊗ Nutrientes
⊗ pH
⊗ Temperatura
⊗ Presión Extrínsecos
osmótica
⊗ Humedad
⊗ Temperatura
almacenamiento
⊗ Atmósfera
Bioindicadores
Organismos que tienen comportamiento similar
a microorganismos patógenos y cuya presencia
determina la existencia de parásitos y permiten
comparar sus reacciones a cambios en
diferentes factores.

Múltiples metodologías para detectar

contaminación microbiana:

⊗ Elevado costo
⊗ Largos tiempos de análisis
⊗ Dificultad para aislar microorganismos
 Características

⊗ Disminuir costos
⊗ Mayor eficiencia en el tratamiento y control del
agua
⊗ Mayor control de las enfermedades asociadas
⊗ No deben estar presentes en el agua
contaminada
⊗ Mayor presencia que la de patógenos
⊗ Sobrevivir más tiempo en el agua
⊗ Igual o mayor resistentes a factores externos
⊗ No hay un indicador ideal
Indicadores biológicos
más utilizados.

Bacterias de la flora saprófita

intestinal (Bacteroides fragilis,
bacterias mesófilas, coliformes
totales, y fecales, Escherichia
coli y estreptococos fecales)
 Factores que aumentan los
microorganismos
Directa o indirectamente

⊗ Urbanización no controlada.
⊗ Crecimiento industrial.
⊗ Pobreza.
⊗ Ocupación de regiones deshabitadas.
⊗ Disposición inadecuada de excretas.
⊗ Actividades agropecuarias.
⊗ Disposición inadecuada de aguas
residuales.
Enfermedades transmitidas
por el agua.

Las enfermedades transmitidas

por el agua son de distribución
mundial, causantes de
epidemias tanto en países
desarrollados como en vía de
desarrollo.
 17

MALARIA

ANEMIA

SARNA

CEGUERA HEPATITIS

CÓLERA
 18

1.6 millones
de muertes en el mundo anualmente por diarrea
 19

<100 UFC/mL
Agua purificada

<10 UFC/mL Límites microbiológicos

Agua para inyectables

<10 UFC/mL
Agua altamente purificada
Tratamiento del agua
Cámara de
Agua cruda Cribado Sedimentación mezcla del
floculante

Canales de Cámara de
Clarificador
sedimentación floculación

Cloración Almacenamiento
 Análisis
microbiológico

El análisis microbiológico del
agua se puede llevar a cabo
por diversos métodos.
⊗ Siembra en profundidad
⊗ Siembra por extensión
⊗ Método del número más probable
⊗ Filtración por membrana
⊗ Biología molecular (como PCR)
 TÉCNICAS
MICROBIOLÓGICAS
PARA EL ANÁLISIS DE
AGUA
Coliformes y calidad del
agua
Indicador muy utilizado
para detectar
contaminación microbiana
del agua.

Su presencia en el agua
indica una probable
presencia de patógenos y
malas condiciones de
higiene.
Bacterias coliformes:

⊗ Bacterias Gram (-) aerobias o

anaerobias facultativas
⊗ Con forma de bastones que no
forman esporas
⊗ Fermentan la lactosa y forman un
gas dentro de las 48 h de
colocadas en caldo de lactosa a
35°C
⊗ Coliforme fecal predominante: E
coli (no apta para su consumo
humano)
Método de filtración por membrana
para determinar bacterias coliformes
en agua.
 EMB también es
diferencial. Muy
fermentativas: E.
coli (forman
colonias con centros
1 2 3 más oscuros)
Poco fermentativas:
Proteus
 Método del sustrato cromogénico
Cromogénico

Los medios de cultivo contienen nutrientes

indicadores que, hidrolizados por las enzimas
específicas, provocan un cambio de color en el
medio.
Permite identificar Coliformes totales y
simultáneamente E.coli de forma específica.

Se basa en las actividades enzimáticas

específicas:
Coliformes totales

Hidrólisis del sustrato cromogénico y sus productos.

Incoloro Amarillo
 E. coli

B-D-glucuronidasa

4-metilumbeliferona

4-metilumbeliferil-B-D-glucurónido
(MUG)

Hidrólisis de un sustrato fluorogénico y su

producto que emite una fluorescencia azul
cuando se expone a la luz ultravioleta.
Método Colilert-Presencia/Ausencia de Coliformes y E.coli

Emite
fluorescencia
cuando es
iluminado por la
luz UV a 365
nm

⊗ Prueba de enzima- ⊗ Agregar el blíster al

sustrato (reactivos frasco (estéril y
específicos) transparente) con
⊗ Presencia o ausencia 100 mL de agua.
de coliformes y E. coli. ⊗ Homogeneización de
⊗ No es necesario hacer la muestra.
confirmaciones ⊗ Incubación: 35°C por
posteriores. 24 horas.
Método del número más probable (NMP)
⊗ Esta técnica de estimación
estadística se basa en el hecho de
que cuanto mayor sea el número de
bacterias en una muestra, mayor
será la dilución necesaria para
reducir la densidad hasta el punto
en al cual no crezca bacterias en los
tubos de una serie de diluciones
⊗ El más útil cuando los
microorganismos por contar no
crecen en medios sólidos
Recuento de bacterias
heterotróficas
 Incubar a
35 ± 0.5
Transferir, con °C durante
pipeta estéril, 1 48 ± 3
ml de la horas.
muestra para
una placa de
Al final del periodo
petri. de incubación, hacer
el recuento de las
colonias.
 Recolección de muestras para las pruebas
microbiológicas(NOM-014-SSA1-1993)
⊗ Realizar con precaución para evitar
todas las fuentes de contaminación
posible.
⊗ Técnica: de muestreo: varía según la
naturaleza del agua a analizar.
⊗ Volumen de la muestra: estará en
función de la técnica microbiológica a
analizar. Por ejemplo: método de
membrana filtrante y método Colilert
(100 mL)
-
⊗ Utilizar frascos de vidrio de boca ancha
esterilizados o bolsas de plástico
desechables estériles de capacidad
suficiente.
 Rotulación
Datos del solicitante:
⊗ Nombre de la persona o entidad y
dirección completa.

Datos del agua:

⊗ Origen de la muestra (pozo, manantial,
río, etc).
⊗ Dirección o emplazamiento exactos,
término municipal y provincia.
⊗ Fecha y hora de la captación.

Otros datos:
⊗ Si el agua es natural o sometida a un
tratamiento de depuración. Identificar la
persona que tomó la muestra.
Almacenamiento

Una vez tomada la muestra,

debe remitirse cuanto antes al
laboratorio. Es conveniente
realizar el análisis el mismo día
(podrá demorarse hasta 24
horas
. mientras haya sido
conservada en refrigeración).
Procedimiento de recolección de
muestra de agua de un grifo
1) Lavarse las manos adecuadamente o usar
guantes de latex.
2) Sanitizar la boquilla del grifo con alcohol al
70% (grifo cerrado).
3) Dejar correr el agua durante 1 o 2 minutos.
4) Recolectar la muestra sin tocar la boquilla
del grifo.
5) Muestra (3/4 de la capacidad del frasco)
6) Todos lo movimientos se realizarán sin
interrupciones, evitando corrientes de aire.
7 y 8) Rotular el frasco
9 y 10) Colocar la muestra en una caja de
poliestireno para posteriormente enviarla al
laboratorio.
 41

GRACIAS!
Preguntas?
 Bibliografía
⊗ Ríos-Tobón, S., Agudelo-Cadavio, R. & Gutiérrez-Builes, L.
(2017, Febrero). Patógenos e indicadores microbiológicos
de calidad del agua para consumo humano. Facultad
Nacional de Salud Pública, 35, pp.236-247.

⊗ Rosa María Ramírez. (2015). Técnicas básicas de

Microbiología y su Fundamento. México: Trillas,pp
⊗ 157-161
⊗ Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. ; tr.
Adriana Morando y Silvia Rondinone,(2017, buenos
aires).Introducción a la microbiología
⊗ NOM-014-SSA1-1993.Procedimientos Sanitarios para el
muestreo de agua para uso y consumo humano.
⊗ NOM-127-SSA1-1994.Salud Ambiental,Agua Para Uso
y Consumo Humano-Límites Permisibles de Calidad y
Tratamientos a que debe Someterse el Agua para su
Potabilización,