Generacin de la Diversidad de las Inmunoglobulinas: Recombinacin Somtica

Estructura de un Gen
+1
Enhancers

Intrn Exn 1 Exn 2

Intrn Exn 3 UTR

CAT

TATA

UTR

Regin Promotora / Reguladora: Promotor (TATA box, CAT box, etctera) Enhancer
Regin transcribible: UTR (regiones no traducidas) intrones exones

Genes codificantes (traducidos)

+1
Enhancers

CAT

TATA

UTR

Exn 1

Exn 2

Exn 3 UTR

Transcripcin

UTR

Exn 1

Exn 2

Exn 3 UTR

Splicing
mARN
UTR

Exn 1 Exn 2 Exn 3 UTR

Traduccin
Protena

El genoma humano contiene ~20.000 genes que codifican para protenas. Sin embargo, se ha estimado que el proteoma humano contiene ~500.000 protenas.

Cmo explica Ud esta diferencia?

Splicing alternativo

Recombinacin General
Qu es?
Intercambio de material gentico

Entre quines ocurre?

CROMOSOMAS HOMLOGOS (cromtides no hermanas)

Cundo ocurre?

Fases de la meiosis I
Profase I
Leptoteno Zigoteno Paquiteno Diploteno Diakinesis

Metafase I Anafase I Telofase I

Recombinacin general
Requiere segmentos largos de homologa en las secuencias de ADN No hay prdida o ganancia de nucletidos

Recombinacin Somtica
Qu es?
Entre quines ocurre?

Cundo ocurre?

Maduracin de los Linfocitos

Estructura de los receptores de linfocitos ByT

Un individuo puede presentar ms de 10 millones de linfocitos B y T diferentes, cada uno con un receptor nico Cuntos genes se necesitan?

Locus Ig humana

Locus receptor Linfocito T

Puntos de verificacin de la maduracin de Linfocitos

La recombinacin somtica depende de:

a) La existencia de regiones conservadas (SSR) en los intrones que separan los segmentos V, D, J y que guan el proceso de recombinacin
CACAGTG Heptmero
12 o 23

ACAAAAACC Nonmero

b) La existencia de recombinasas especficas (RAG1, RAG2) que slo se expresan en los linfocitos B y T.

Generacin de diversidad
1) DIVERSIDAD COMBINATORIA: Gran parte de la diversidad de las Igs proviene de la recombinacin de distintas copias de los segmentos gnicos V, D, y J

V3

D9 J4

: 29V x 4J = 126
: 40V x 5J = 200 H : 51V x 27D x 6 J= 8262

Combinacin o con H:
(126 + 200) x 8262 3 x 106 162 segm. 3 x 106 paratopes

2) DIVERSIDAD DE LIGACIN Durante la unin de segmentos V, D, J, se producen variaciones o introduccin de codones debido a: a) La flexibilidad en el corte del bucle terminal que introduce nucletidos denominados P.

b) La accin de la enzima TdT (deoxinucleotidil transferasa terminal) que incorpora nucleotidos (N) en el extremo 3.

Diversidad de ligacin = 103: cadena livianas (x10) cadenas pesadas (x 100)

Exclusin allica: solo uno de los alelos de la cadena pesada y de la liviana se expresa

Desarrollo de linfocitos B
Pro-linfocito B
Rearreglo del gen de la cadena pesada Expresin de cadena + sustituto de cadena liviana No hay expresin de Ig

Pre-linfocito B

Rearreglo del gen de la cadena liviana

Linfocito B maduro
Estmulo por el antgeno

Co-expresin de IgM e IgD

Linfocito B activado

Plasmocito

Linfocito B de memoria

En el curso de la respuesta inmune aumenta la afinidad de los anticuerpos y cambian las clases de inmunoglobulinas

Concentracin de anticuerpos

Predominan IgGs
Alta afinidad

Predomina IgM
Baja afinidad

1er dosis

2nda dosis

Curso de la respuesta

La HIPERMUTACIN SOMTICA es un elemento adicional de generacin diversidad Hipermutacin somtica (rganos linfoides secundarios)

Recombinacin somtica (mdula sea)

Hipermutacin somtica : proceso de introduccin de mutaciones puntuales en la regin variable de los genes de las cadenas livianas y pesadas que expresa el linfocito B. La tasa de mutacin es 109 superior a la que ocurre en otras clulas, y no afecta la regin constante de las Igs.

La hipermutacin somtica seguida de la seleccin por el antgeno, dan lugar al proceso de maduracin de la afinidad.
Clula B en proliferacin Progenie con BCRs de distinta afinidad
Alta afinidad Baja afinidad

Hipermutacin somtica

Centro germinal

Seleccin por afinidad

Muerte por apotosis

Clula dendrtica folicular

Proliferacin

El switch de clases permite la secrecin de distintos isotipos de Ig a medida que transcurre la respuesta inmune.

RESUMEN: Formas en que se genera la diversidad en el dominio variable de las Inmunoglobulinas.

- Diversidad de la lnea germinal - Recombinacin somtica Diversidad combinatoria (rearreglo V,D,J) Diversidad de ligacin Combinacin de cadenas livianas y pesadas Diversidad potencial = 109-1011 - Hipermutacin somtica

Receptor T: Mecanismos similares operan en el caso del TCR, con excepcin de la hipermutacin somtica que no existe, y la falta de exclusin allica en el rearreglo de la cadena alfa.

El receptor T (TCR)
El TCR acta exclusivamente como receptor de membrana. De esta forma confiere especificidad al linfocito T al cual pertenecen. Hay dos tipos de TCR formados por cadenas ab o gd. Los TCR ab slo reconocen pptidos que estn formando complejos con molculas de MHC.

La forma de generacin de diversidad del receptor T.

timo

Linfocitos T gd vs ab proceden de un precursor comn, y no se conocen las seales que

determinan cual se expresar.

Evento
Diversidad combinatoria Diversidad de unin Switch de clases Hipermutacin

Proceso
Recombinacin somtica Insercin N Recombinacin somtica Mutaciones puntuales del ADN

Cambio
Irreversible Irreversible Irreversible Irreversible Reversible Reversible

Linfocito B

Expresin (superf.) de Splicing alternativo IgM e IgD Forma secretada v/s membrana Splicing alternativo