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Escola Superior Agrria de Viseu Reproduo Animal

Transferncia de embries Estado da Arte

2 SEMESTRE

13 - 06 - 08

1. Introduo
TE uma biotcnica que permite a recolha de embries, seleccionando os de elevada qualidade gentica e maior resistncia s doenas Os embries de uma fmea doadora so transferidos para fmeas receptoras as quais levaro a gestao a termo. O objectivo desta tcnica em bovinos a amplificao das taxas reprodutivas de fmeas valiosas.

2. Histria
No uma tecnologia recente, sendo a primeira transferncia de embries de bovinos relatado em 1949 (Umbaugh, 1949). E o primeiro bezerro de transferncia de embries em 1951 (Willett et al., 1951). Nas ultimas dcadas a TE tem vindo a ser difundida por todo o mundo. Em Portugal tem vindo a ser utilizada: no Programa Nacional de Melhoramento Gentico da bovinicultura leiteira; no sector produtivo em algumas exploraes leiteiras; raas autocnes.

Ai!! Senhor Doutor, cuidado!

2.1 Seleco da Doadora


o feita pelo proprietrio;
o Elevado valor gentico; o Em casos de infertilidade; o Deve apresentar estrutura e funo reprodutora normais; o E aps dois meses do ultimo parto.
uma escolha importante!

2.2. Seleco da Receptora


o Novilhas ou vacas jovens;
o Estrutura e funo reprodutora normais; o Tamanho e grau de maturidade do animal deve coincidir com a raa e tipo de embrio a ser implantado;

o Dois meses aps o parto.

2.3.Vantagens da T.E.
o Melhoramento gentica;
o Aumento de crias por vaca/ano; o Optimizar a seleco das doadora; o Diminuir o intervalo entre geraes;

o Controlo sanitrias dos efectivos;


o Proteco de espcies ou raas em vias de extino; o Induo de gmeos; o Importao e exportao comercial de embries;

o Pode ser implementada em pequenas exploraes;


o Diagnostico e teraputica de infertilidade:
Endometrites Subclinicas

Obstruo dos oviductos Existncia ou no de fertilizao Avaliao do estado embriolgico Exame citolgico, microbiolgico e virulgico

2.4. Desvantagens
o Requer um nmero elevado de gesto; o Aumento potencial da propagao de certas doenas; o Nem todos os potenciais doadores conseguem responder positivamente ao tratamento; o Aumentos (variveis) das despesas e custos, sendo mais elevados para a produo dos vitelos.

3. Procedimentos na Transferncia Embries

3.1. (clicar) Superovulao da doadora com Gonadotrofinas

3.2. Inseminao Artificial (5 dias 3.3. Recolha no cirrgica de depois de iniciar a Superovulao) embries (6 a 8 dias aps inseminao)

Cateter de Foley para Recolha de Embries

3.4. Isolamento e Classificao de Embries

3.5 Conservao de Embries

3.6. Transferncia de Embries

Dignostico de gestao por Palpao Rectal (1 a 3 meses depois)

Parto (9 meses aps a transferncia)

3.1. Superovulao
o Consiste na administrao de hormonas Gonadotrofinas superovulatorias

o Existem vrios mtodos, sendo os seguintes mencionados os mais utilizados:

1 Utilizao da Gonatrofina Corinica Equina (eCG);


2 Utilizao do Hormona Foliculo-estimulina (FSH-p)

1 Utilizao de eCG
o eCG uma glicoprotena produzida pelos clices endometriais da gua.
o Administrao intramuscular de 1800 a 3000UI de eCG, entre os 8 e os 12 dias do ciclo estrico.
o 2 a 3 dias depois administra-se prostaglandina F2 alpha ou analogo (I.M.). o 12 a 24h depois repete-se a dose.

Cont.
o Um dos inconvenientes deste mtodo deve-se ao facto do ovrio ficar com um maior volume devido meia vida da eCG ser muito longa (5 dias), havendo um continuo recrutamento de folculos aps a ovulao.

Nveis elevados de estrogenio

Afecta a taxa de fertilizao e a qualidade embrionria.

Cont.
oDeve-se tambem ter em ateno que a eCG induz uma resposta imunolgica com a produo de anticorpos anti-eCG. oPara eliminar este efeito, num prximo tratamento, vai-se proceder administrao de um soro anti-eCG que deve ser dado logo aps o pico provulatrio de LH. Na pratica administrado no momento da I.A. oNos tratamentos superovulatrios seguintes (num mesmo animal), deve-se fazer um aumento na dose de eCG para que se obtenha sucesso.

2 Utilizao de FSH-p
oObtida atravs de extractos hipfisarios sunos
o Provoca a estimulao dos folculos pequenos, devendo ser administrado antes de haver um folculo dominante. o Administra-se 8 a 10 injeces da hormona, com 12 horas de intervalo entre elas o Doses de 6; 6; 4; 4; 2; 2; e 2mg (SC ou IM) CAMPO o48 a 72 horas tambm se administra prostaglandina F2,alpha. (regresso corpo lteo)

O cio ocorre 48h depois da administrao.

Cont. o Principal desvantagem deste mtodo a maioria da FSH-p ser muito impura.
oTem havido uma melhoria do produto, sendo a contaminao pela LH diminuida.
oAltos niveis de LH provoca uma ovulao prematura ou lutenizao dos folculos.

Baixa Produo Ovulatria


Ateno: baixos nveis de LH vai melhorar a resposta ovulao

Este mtodo tem mais sucesso que o anterior.

Outras hormonas utilizadas:


o EPE (extracto hipofisiario equino) oFSH-O (extracto hipofisiario ovino) oHMG (Gonadatrofina isolada da urina das mulheres em menopausa)

No entanto no so muito utilizadas, devido indisponibilidade no mercado e quando se encontram tm custos elevados.

Considera-se que houve resposta ao tratamento de superovulao sempre que se obtiveram mais de duas ovulaes.

3.1. 1. Modificaes nos esquemas de Tratamento


As modificaes do tratamento limitam-se ao FSH-p pois representa um problema do ponto de vista pratico, pelo numero de aplicaes utilizadas em programas de T.E. Novas alternativas estudadas: o Reduo na durao do tratamento de 4 para 3 dias. J se fez uma nica dose (SC); Administrao de uma dose diria (4 dias). No teve aceitao na pratica, pois a meia vida da FSH-p de 12 a 14 horas. Mudanas na via de administrao. Foi proposto administrao contnua por via intra-arterial ou mesmo via endovenosa, com o objectivo de manter um nvel de hormona no sangue.

3.2. Inseminao Artificial


o Esperma de alta qualidade; o A colocao atempada de esperma essencial para garantir a fertilizao do maior nmero de ovos possveis;

o Devido ao nmero de ovos e sua libertao, as fmeas deveram ser inseminadas uma a trs vezes durante e aps o estro;
o O custo do smen utilizado provavelmente vai determinar o nmero de inseminaes; o Se s for feita uma inseminao, esta deve ser feita 24 horas aps ter sido detectado o estro .

3.3. Recolha de Embries


Metodo cirrgico
o Lapararotomia na linha mdia;
o Anestesia Geral; o Tem vindo a ser substitudo pelo mtodo no cirrgico;

Metodo no cirrgico
o A doadora deve ser contida convenientemente;
o Administrao de anestesia epidural caudal
evitar as contraces uterinas
relaxamento do recto

o Recolha das fezes contidas no recto, e assepsia da vulva e do perinio.

o Deve-se deixar secar toda esta zona de forma a evitar o arraste de produtos de assepsia.
o Evitar a entrada de ar no recto.

oPode-se utilizar um cateter PVC Foley com trs vias ou um com duas vias.

Cont.
o So constitudos por silicone, suportando a esterilizao em auto clave, assim como a capacidade de manter a forma concntrica do balo e as vrias sadas de drenagem.
o Antes de se introduzir o cateter nos cornos uterinos, este deve ter passado por uma soluo de lavagem uterina: PBS (soluo salina tamponada e enriquecida com fosfato); o O cateter e constitudo por: mandril (no seu interior) papel de aluminio (extremidade posterior) balo (inflado quando ultrapassado o cervix) o Depois feito o encaixe do tubo Y de PVC, juntamente ao filtro e bolsa de lavagem.

o Esta deve permanecer a uma temperatura de 37oC at o momento da colheita.

Cont.
oA lavagem realizada com pequenos volumes de DPBS (Dulbecco phosphate buffer solution) em quantidade que preencha todo o interior uterino (300ml ou 1 2L)
oUma prtica interessante consiste em encher os cornos uterinos com PBS, bloquear a sada do cateter e soltar o animal no estbulo enquanto realizada a procura dos embries. oAntes utilizava-se o mesmo meio (PBS suplementado com soro) para realizar a colheita e a conservao dos embries.

o Actualmente, vrias empresas oferecem meios mais complexos, elaborados especificamente para atender as diversas etapas da TE.
o No existem provas cientficas que o uso desses produtos resulte numa melhoria significativa da qualidade aps a colheita ou das taxas de gestao. oNo final,o filtro segue para laboratrio, onde se vai proceder lavagem deste. O lquido obtido com esta lavagem vai ser armazenado numa placa de Petri com meio de manuteno para posterior avaliao

3.5. Classificao de embries


Este um dos passos importantes para o sucesso do programa de TE.
As caractersticas morfolgicas avaliadas, para que um embrio seja considerado vivel so:
Forma esferide; Aparncia clara e ntida dos blastmeros; Uniformidade da membrana celular; Ausncia de vacolo e fragmentos celulares no espao perivitelneo; Proporcionalidade entre o embrio e o espao perivitelneo; Tonalidade escura e uniforme;

Compactao dos blastmeros entre si;


Uniformidade da membrana celular; Simetria dos blastmeros;

Integridade da zona pelucida;


Ausencia de fragmentos celulares aderidos zona pelucida;

3.6. Conservao de Embries


Depois da recolha de embries segue-se o seu armazenamento, com o objectivo de os preservar para posteriores utilizaes. o Os embries podem ser armazenados com xito em nitrognio lquido usando
glicerina como crioprotector, em palhas de plstico de 0,25 e 0,5 ml. oUltimamente, os embries bovinos tm sido congelados, usando o etilenoglicol como crioprotector: o Dada a sua grande permeabilidade permite a transferncia do embrio imediatamente aps a descongelao. o O embrio no precisa de ser removido da palhinha de congelao original e de ser exposto a passagens sucessivas por solues com concentraes decrescentes de crioprotector. o Revelou igual eficincia que o mtodo convencional com: reduo de custos laboratoriais, simplificao da tcnica e racionalizao dos cios espontneos de potenciais receptoras.

3.7. Transferncia de Embries


So conhecidos dois mtodos, o cirrgico e o no cirrgico. O primeiro tem vindo a ser substitudo pelo segundo, de forma a garantir o bem-estar das receptoras.
o Esta tcnica realiza-se usando uma pipeta Cassou, tambm usada em Inseminao artificial, mas ligeiramente modificada. o Cada embrio, com um pequeno volume de PBS aspirado para uma palha com uma pequena bolha de ar de cada lado para facilitar a identificao. A palha colocada na pipeta de Cassou. o Os ovrios so palpados com suavidade para se determinar que ovrio contm o C.L. oA vaca mantm-se imobilizada num tronco, com anestesia epidural caudal.

Cont. oDe seguida limpa-se completamente a vulva e o perneo;

o Coloca-se na abertura externa do clo do tero a pipeta e introduz-se suavemente usando procedimento normal de inseminao artificial;
o Avanar cuidadosamente ao longo do corno adjacente ao CL, comprimindo fortemente o mbolo para expulsar o embrio; oPor ltimo a pipeta retirada com muito cuidado.

A palpao do aparelho genital dever ser to mnima quanto possvel e a tcnica deve ser realizada prestando a mxima ateno s regras de higiene.

4. Fertilizao in Vitro
A fertilizao in vitro uma biotcnica utilizada para acelerar a produo de animais de nvel gentico superior.
Comeou por ser usada como alternativa recolha de gmetas de vacas superovuladas, fazendo-se a recolha de um ovrio, em matadouro, recuperando se milhares de ocitos. Recentemente, faz-se a recolha de ocitos em vacas de super produo, utilizando aspirao orientada com imagens de ecografia transvaginal.

Cont.
A FIV envolve a produo de embries produzidos in vitro, at ao estado de mrula, incluindo as seguintes etapas: - Maturao - Fecundao - Cultura in Vitro A FIV possibilita que uma reprodutora produza centenas de bezerros num mesmo ano. Esta tcnica permite evitar a rejeio precoce de fmeas geneticamente privilegiadas, portadoras de alteraes adquiridas que impeam que a reproduo ocorra de forma natural.

5. Concluso
Em vista das diversas biotecnologias desenvolvidas na rea de reproduo animal, a transferncia de embries trouxe um incremento positivo para a produo animal. Os protocolos para superovulao ainda no so perfeitos e devem ser adequados na sua individualidade de cada animal para obteno de respostas cada vez melhores. uma tcnica dispendiosa que somente permite a produo de crias geneticamente privilegiadas e com alto valor de mercado

6. Bibliografia
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Obrigado pela Ateno!


Trabalho realizado por:
Alisha Oliveira Ana Rosa Patricia Santos n 1556
n 1543 n 1545

13 06 - 08

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