Tecnologa del ADN recombinante

Alejandro Martnez Carballo LACC2

ENZIMAS DE RESTRICCIN
Las enzimas de restriccin son protenas cuya funcin es cortar las hebras de ADN. Se podra decir que son tijeras moleculares que cortan ADN. Lo hacen en forma especfica. Esto significa que cada enzima reconoce un sitio particular del ADN, es decir que reconoce una secuencia particular de nucletidos. Esa secuencia especfica para cada enzima se denomina sitio de restriccin . Una vez que la enzima reconoce estos sitios, se posiciona sobre la molcula de ADN y corta dentro o en torno de esa secuencia.
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Acorde a como realizan el corte, las enzimas se pueden clasificar en:

*Enzimas que generan extremos romos (parejos) *Enzimas que generan extremos cohesivos (desparejos). Estos extremos colgantes de simple cadena pueden pegarse con otros extremos de cadena simple que tengan la secuencia complementaria. Las enzimas encargadas de unir los extremos de ambas cadenas se denominan ligasas.

Usos de las enzimas de restriccin

Las enzimas de restriccin tienen diferentes aplicaciones que son de gran importancia en investigaciones en biologa molecular y en las tcnicas que emplea la biotecnologa moderna:

Hacer mapa de restriccin de un plsmido o bacterifago.

Generacin de fragmentos para ser clonados en los vectores apropiados, y crear ADN recombinante. recombinante
Se puede cortar una molcula de ADN con una enzima y, con el mismo tipo de enzima, cortar el fragmento de ADN de inters para clonar. Se unen con ligasas estas dos molculas de ADN, generando as una molcula de ADN recombinante. Este vector recombinante puede usarse para transformar clulas que expresen el gen de inters o puede usarse simplemente para tener clonado ese fragmento de ADN de inters.

Fragmentar ADN para separacin por electroforesis. electroforesis.

Los fragmentos obtenidos despus de la actuacin de las distintas enzimas de restriccin, se pueden separar por tamaos mediante la tcnica de electroforesis y as estudiar los distintos fragmentos.

Electroforesis
La electroforesis en gel es un grupo de tcnicas empleadas por los cientficos para separar molculas basndose en propiedades como el tamao, la forma o el punto isoelctrico. Se utiliza generalmente con propsitos analticos, pero puede ser una tcnica preparativa para purificar molculas parcialmente antes de aplicar espectrometra de masas, PCR, clonacin o secuenciacin de ADN.

Esto se logra por la diferencia de desplazamiento de las molculas a lo largo de un gel sometido a un campo elctrico. La carga elctrica sirve como fuerza impulsora que atrae las molculas cargadas negativamente hacia el otro extremo del gel que posee carga positiva.

En esta tcnica las protenas sufren un tratamiento por agentes reductores que provocan la prdida de las estructuras secundaria . De este modo, la estructura tridimensional de las protenas no influye en la electroforesis, y pueden separarse nicamente en funcin del tamao.

Bacterifago Lambda

Bacterifago Lambda: un opern complejo

Cuando una bacteria es infectada por una partcula de fago lambda, dos posibles situaciones pueden ocurrir: (1) el fago puede integrarse al cromosoma bacteriano como profago inerte. (2) el fago puede producir las enzimas necesarias para la reproduccin, maduracin y lisis celular.

Para finalizar, dos enlaces de videos de apoyo para comprender mejor las tecnicas del ADN recombinante:

http://www.youtube.com/watch?v=QEG8dz7cbnY http://www.youtube.com/watch?v=6vKLT5mQoBM