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Sumrio
INTRODUO A Leishmania e sua transmisso TRATAMENTO FARMACOLGICO DAS LEISHMANIOSES ENZIMAS PROTEOLTICAS PROTEASES DE Leishmania como novo alvo para desenvolvimento de novos frmacos
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Protozorios do gnero Leishmania so responsveis por um amplo espectro de doenas tropicais e subtropicais do homem e de outros animais nas regies quentes do Velho e do Novo Mundo. As leishmanioses so endmicas em 88 pases com estimativa de 12 milhes de casos no mundo. Seu controle possvel pela interrupo do ciclo de transmisso da Leishmania atravs de: -Inseticidas (j que a transmisso por mosquito), -Proteo individual, -Eliminao de animais domsticos infectados, -Deteco e tratamento precoce de casos humanos... representam algumas das estratgias usadas para prevenir a transmisso.
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Introduo
A Leishmania
apresentam
Amastigotas
- No possuem flagelo livre - So parasitos intracelulares obrigatrios preferencialmente do sistema fagoctico mononuclear (macrfagos) de hospedeiros vertebrados (homem, co), onde se dividem por diviso binria simples.
Promastigotas
- So formas flageladas - Encontradas no trato digestivo dos hospedeiros invertebrados (mosquito flebtomo).
4 J. Braz. Ass. for Advance. Sc i. 1992, 44, 94
Transmisso da Leishmaniose
A infeco do hospedeiro invertebrado (mosquito flebtomo) ocorre quando a fmea do vetor pica um vertebrado (homem ou co, rato) infectado durante o repasto sanguneo e, juntamente com o sangue, ingere macrfagos parasitados.
Quando o mosquito infectado pica novamente, ele regurgita os parasitos para o interior da pele do hospedeiro vertebrado (homem ou co), inoculando-os no local da picada, ocorrendo assim a transmisso. 5
Parasite 2008, 15, 237
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Objetivos
Identificar novas molculas na Leishmania para melhor compreender sua interao com os hospedeiros e investigar a possibilidade do emprego destas molculas como alvos para o desenvolvimento de novos frmacos.
Os antimoniais pentavalentes (Sb5+) tm sido utilizados no tratamento das leishmanioses humanas desde o incio do sculo XX e continuam sendo as drogas de escolha para a doena tegumentar (cutnea) e visceral. 8
Lancet 1999, 354, 1191
Os atimoniais foram usados pela primeira vez em 1912 pelo mdico brasileiro Gaspar de Oliveira Vianna na sua forma trivalente (Sb3+), o chamado trtaro emtico (tartarato de potssio e antimnio). Obteve bastante sucesso, pois naquela poca 90% dos casos evoluam para o bito por no haver tratamento adequado. No entanto, esta formulao apresentava grande toxicidade para 9 o hospedeiro.
Pentostan
Estibogluconato de sdio
Glucantime
2- Antimoniato de meglumina
Em 1937, o estibogluconato de sdio (A, Pentostan , um derivado do cido estibnico complexado ao Sb5+) foi utilizado, tambm por via intramuscular, reduzindo os efeitos colaterais e a toxicidade. No Brasil, atualmente, o frmaco utilizado o antimoniato de 10 meglumina (B, Glucantime ).
A cura clnica no acompanhada de cura parasitolgica, pois tm sido observados parasitos na cicatriz de indivduos 12 clinicamente curados aps tratamento. Am. J. Trop. Med Hyg. 1998, 58, 824.
Fungizone
anfotericina B
Lomidina
4- Isetionato de pentamidina
5-miltefosine 6-paramomicina
So medicamentos alternativos nos casos de resistncia aos antimoniais, mas no possuem um ndice teraputico to favorvel (se ultrapassar um pouco a dose indicada pode causar toxicidade) e 13 tambm apresentam importantes reaes adversas (no previsveis).
Drugs 1998, 56, 1009
A Leishmania e os fungos possuem ergosterol como principal esteroide nas membranas plasmticas. 14
Mecanismo de ao da Anfotericina: Anfotericina liga-se ao ergosterol, causando alterao da permeabilidade de membrana e do equilbrio osmtico do parasito (efeito leishmanicida). Seu uso clnico recomendado para os casos graves de leishmaniose no responsiva ao tratamento convencional e bastante restrito devido aos inmeros efeitos txicos que 15 apresenta.
Trends Parasitol. 2003, 19, 232.
Medicamentos disponveis apresentam uma srie de problemas, que incluem resistncia do parasito e induo de efeitos colaterais, que limitam a utilizao e, principalmente, a eficcia. Alm disso, todos os medicamentos so para administrao parenteral (intravenosa ou intra-muscular) o que exige colaborao do paciente e infelizmente, muitos abandonam o tratamento, fator que favorece o aparecimento de cepas de leishmania resistentes.
16 Braz. J. Pharm. Sc i. 2004, 139, 221.
Com o objetivo de desenvolver medicamentos mais eficazes, de baixo custo e com reaes adversas menos agressivas para o hospedeiro (homem), novos alvos quimioterpicos da Leishmania tm sido investigados e novas abordagens para o desenvolvimento de frmacos devem ser consideradas: as proteases de Leishmania como novos alvos
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O QUE SO PROTEASES ?? Definio de proteases ou peptidases: So enzimas que catalisam a hidrlise de ligaes peptdicas em protenas ou peptdeos, liberando peptdeos de tamanho varivel ou aminocidos livres.
As proteases de parasitos participam de vrias etapas essenciais para sobrevivncia do parasito: - Invaso ao hospedeiro, - Da assimilao dos aminocidos como fonte nutricional ou para sntese de substncias orgnicas, - No metabolismo de protenas ou peptdeos biologicamente ativos, -Na diferenciao e no escape ao sistema imune do hospedeiro, - Na resistncia do parasito terapia medicamentosa. APS A IDENTIFICAO DAS ENZIMAS PROTEOLTICAS PRESENTES NO PARASITO (Leishmania) O DESAFIO DESCOBRIR INIBIDORES QUE INATIVEM SUA 19 ATIVIDADE PROTEOLTICA.
A protelise um mecanismo muito comum em todas as clulas e pode ser dividida em duas categorias distintas: 1 - Protelise limitada So clivadas apenas uma ligao peptdica ou um nmero limitado delas numa protena especfica, Presta funes regulatrias, no destri o substrato, mas modifica suas propriedades e funes biolgicas. 2 - Protelise no limitada Causa a completa eliminao de uma protena para regular seu nveis intracelulares, Compreende a completa degradao da protena alvo atravs da hidrlise de mltiplas ligaes peptdicas.
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Existem um complexo de protenas capaz de degradar praticamente qualquer protena em peptdios e aminocidos: Sendo este complexo denominado de Proteassoma
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Proteassoma
Ubiquitina
Protena
Peptdeos
Proteassoma
O proteassoma reconhece especificamente protenas ubiquitinadas e com o consumo de ATP capaz de degradar praticamente qualquer protena em peptdios e aminocidos.
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Proteassoma
Ubiquitina
Protena
Peptdeos
O proteassoma constitudo por um complexo cataltico central denominado 20S, preso nas suas duas extremidades laterais a complexos regulatrios 19S.
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O complexo 20S formado por 2 anis alfa e 2 anis beta na sequncia alfa-beta-beta-alfa, cada um formado por 7 subunidades distintas, sendo os anis alfa estruturais e os beta catalticos.
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Proteassoma
Ubiquitina
Protena
Peptdeos
Complexo 19S Protena Complexo cataltico Proteassoma central (20S) Diferentes subunidades beta realizam diferentes clivagens proteicas. As subunidades alfa estabilizam as subnidades beta e ligam o complexo 19S. O proteassoma tem o formato de um tubo, com duas entradas nas extremidades 19S, um subcomplexo de 19S ancora a cadeia de poliubiquitina e se anexa superfcie de 20S, usando energia para desdobrar a protena e 25 preparando o canal que leva cmara proteoltica de 20S.
Proteasoma
Ubiquitina
Protena
Peptdeos
Os principais stios celulares de protelise so o citoplasma e os lisossomas, mas tambm podem ocorrer nas mitocndrias, lmem do retculo endoplasmtico e endossomas. As protenas citoslicas de curta durao parecem ser degradadas no citoplasma por um mecanismo ubiquitina-dependente, enquanto que a maioria das protenas de longa durao captada pelos lisossomas por autofagia e que 26 protenas extracelulares podem ser degradadas nos lisossomas por heterofagia.
A atividade proteoltica em parasitos do gnero Leishmania foi primeiramente reportada por Pupkins e Coombs.
Cisteno-protease Estrutura tridimensional As cisteno-proteases foram as principais proteases detectadas na Leishmania mexicana. So ativas sob o pH cido dos lisossomos (~5), o que torna sua atividade quase que inteiramente restrita no interior dessa organela. Alm da cisteno-protease outras classes de proteases asprtico-protease, metaloprotease e serino-proteases.
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Zn2+
Zn2+
metaloprotease zinco-dependente Estrutura tridimensional Leishmanolisina ou glicoprotena de 63 kDaltons (gp63) uma metaloprotease zinco-dependente, sendo uma das principais molculas de superfcie presente em todas as espcies de Leishmania (representa mais de 1% da protena total do parasito).
28 Parasitol Res. 2003, 91, 229.
C3b
Aps a clivagem do C3b em C3bi, facilitado a fixao da Leishmania ao macrfago e a ligao s clulas natural killer (clulas NK) inibindo sua proliferao e facilitando assim a infeco parasitria.
29 Clin. Exp. Immunol. 2008, 153, 221.
Devido grande importncia da gp63 na virulncia da Leishmania, postulou-se que a inibio da sua atividade poderia interferir no curso da infeco
Inibidor de metaloprotease
Com isso, inibidores de metaloproteases foram utilizados em culturas de promastigotas de Leishmaina, mas tais compostos no demonstraram o efeito citotxico esperado.
30 Vacc ine 2007, 25, 7962.
Alm disso, a gp63 tem sido empregada em vrios estudos de imunizao experimental contra diferentes espcies de Leishmania e tem conferido proteo efetiva em camundongos suscetveis
Inibidor de metaloprotease
Entretanto, ces e macacos no desenvolveram resposta imune protetora quando estimulados por diferentes formulaes contendo leishmanolisina. Estudos continuam sendo conduzidos para estudar a melhor formulao e administrao da gp63 que confira mais imuno-proteo e31 sua possvel utilizao em vacinas contra leishmanioses Vet. Parasitol. 1995, 60, 199.
A anlise do genoma de Leishmania major previu que este parasito possua aproximadamente 154 peptidases (incluindo asprtico, cisteno, metalo e serino-proteases), representando aproximadamente 1,8% do seu genoma.
Existem 3 famlias de genes que codificam para pelo menos 6 tipos de catepsinas diferentes de Leishmania
a inibio de apenas um tipo de cisteno-protease insuficiente para bloquear a replicao do parasito. Sendo assim, necessrio um inibidor de cisteno-protease 33 com amplo espectro de ao.
A inibio das proteases de Leishmania pode representar uma valiosa abordagem para o desenvolvimento racional de frmacos para o tratamento das Leishmanioses, Produzindo drogas que possivelmente apresentem menos efeitos adversos para o hospedeiro e que tenham melhor ndice teraputico do que as drogas de uso corrente.
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Concluses
O emprego de inibidores de proteases no tratamento das leishmnaioses ainda no uma realidade como para o tratamento da AIDS e para outras doenas como enfisema pulmonar, hipertenso arterial, alguns tipos de cnceres e trombose. Estudos mais extensivos so necessrios para se entender melhor o papel das proteases na fisiologia do parasito, bem como na patognese das leishmanioses.
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Concluses
Os inibidores especficos da atividade destas enzimas, sejam de origem sinttica ou natural, constituem-se em ferramentas essenciais para este estudo e tambm para o desenvolvimento de novas molculas que inibam proteases essenciais na fisiologia da Leishmania parasito, bem como nos processos patolgicos por ela provocados. Alm disso importante reconhecer o quo distintas estas proteases so das proteases do hospedeiro para minimizar os tantos efeitos adversos induzidos pela terapia convencional.
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