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CITOGENETICA
CITOGENETICA
Ciencia hbrida que intenta correlacionar
CITOGENETICA
CITOGENETICA
Fundadores de la citogentica humana. Jrme Lejeune Klaus Patau
La Citogentica
Es el estudio, dentro del campo de la gentica, de los cromosomas, su estructura, su herencia y del lugar donde se encuentran
Citogentica Convencional
Citogentica Molecular
FISH clsico
M-FISH SKY CGH
Banda Q
Las bandas G oscuras corresponden a las Q brillantes Patrn inverso al de las Q y G, tiles para definir los extremos de los cromosomas. Resaltan las regiones telomricas.
Varias tcnicas
Varias tcnicas
Resaltan las regiones centromricas. Tien las regiones organizadoras del nuclolo (acrocntricos en el hombre)
NOR
CROMOSOMAS
Son estructuras complejas localizadas en el ncleo
de las clulas, compuestos por DNA, histonas y otras protenas, RNA y polisacridos.
Normalmente no se pueden ver con un
microscopio ptico, pero durante la divisin celular se condensan lo suficiente como para poder ser fcilmente analizados a 1.000 aumentos.
CROMOSOMAS
Generalidades: 23 pares. 22 autosmas 1 par sexual. Nmero total de cromosomas Genoma. Los cromosomas contienen aprox 35.000 genes, formados por 3 billones de pares de bases (tamao del genoma), cuya secuencia hace la diferencia entre los organismos.
Morfologa Cromosmica
Metacntrico (Cromosoma 1)
Submetacntrico (Cromosoma 9)
CARIOTIPO HUMANO
Anlisis cromosmico Es el conjunto de cromosomas de la especie Su determinacin se realiza observando durante la metafase la dotacin cromosmica de una clula. Uso: Identificar anomalas cromosmicas como causa de malformaciones o de enfermedad. Contar la cantidad de cromosomas Detectar cambios cromosmicos estructurales Los resultados pueden indicar cambios genticos asociados con una enfermedad.
CARIOTIPO HUMANO
Cuando esta indicado el examen. A una pareja con antecedentes de abortos. Evaluar la apariencia anormal del cuerpo que sugiere una anomala gentica. Diferentes tipos de leucemia. Defectos mltiples al momento del nacimiento. Presencia de genitales ambiguos.
CARIOTIPO HUMANO
Muestra: Sangre. Mdula sea.(biopsia de mdula sea) Lquido amnitico.(amniocentesis) Tejido placentario.(vellosidades corinicas, aborto espontneo )
Procedimiento
Recoleccin de la muestra y preparacin inicial.
Cultivo celular.
Inhibidor de la mitosis para detener las clulas en
metafase. Las clulas se seleccionan. (Sln fijadora) Los cromosomas se tien y se observan bajo el microscopio. Fotografa para obtener un cariotipo que muestre la disposicin de los cromosomas.
Microscopio Invertido
CARIOTIPO HUMANO
Metafase 46,XX
Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), meta y submetacntricos Grupo B, (cromosomas 4 y 5), submetacntricos - Cromosomas medianos Grupo C, (cromosomas 7, 8, 9, 10, 11, 12 y adems los cromosomas X), submetacntricos Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15) acrocntricos - Cromosomas pequeos Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18) submetacntricos Grupo F, (cromosomas 19 y 20) metacntricos Grupo G, (cromosomas 21 y 22) acrocntricos Por acuerdo los cromosomas sexuales X e Y se separan de sus grupos correspondientes y se ponen juntos aparte al final del cariotipo.
CARIOTIPO HUMANO
CARIOTIPO
Ventajas 1- Permite ver al genoma entero en una sola vez. 2- Conveniente cuando se sospecha una anomala especfica (ejm. Ph en LMC) y como herramienta de Dx general para detectar el chr adicional. Anormalidades comnmente vistos en la progresin de la enfermedad de LMC Desventajas 1- Detecta anormalidades estructurales grandes
2- Necesita mucho trabajo y alta experiencia y habilidades por el operador
( una banda = 6Mb de DNA ~ 150 genes ).
Cariotipo de un linfocito
FISH
Qu es FISH?
FISH es una tcnica mixta de citogentica molecular que nos permite el diagnstico rpido de anomalas cromosmicas en metafase o interfase. Utiliza para ello una sonda de ADN marcado
FISH Metafase
FISH Metafase
Clula en metafase que se ha hibridado con la sonda para el sndrome DiGeorge causado por una microdelecin en el cromosoma 22. La seal verde es un control interno situado en 22q13. Permite identificar rpidamente los dos cromosomas 22. La seal roja est situada en la regin DiGeorge, en 22q11.2. Puesto que ambos cromosomas 22 tienen la seal roja, en esta clula no hay microdelecin en la regin DiGeorge y este paciente no tendra el sndrome DiGeorge
FISH Interfase
Trisoma 21 El ncleo de la izquierda se ha hibridado con sondas para los cromosomas 13 (verde) y 21 (rojo), y tiene tres seales rojas.
El ncleo de la derecha se ha hibridado con sondas para los cromosomas 18 (azul claro), X (verde) e Y (rojo).
Hibridado con una sonda "de pintado" para el cromosoma 4, que fluoresce. Uno de los cromosomas 4 de este paciente era anormal, pero era difcil determinar con la citogentica de rutina si tena una pequea delecin terminal en 4q o si era el resultado de una reordenacin ms compleja. Puesto que ambos cromosomas 4 son fluorescentes en toda su longitud y no hay material fluorescente en ningn otro cromosoma, esto sugiere que la anomala es una delecin terminal pequea.
Esta metafase se ha hibridado con una sonda para la parte terminal del cromosoma 4q. La seal verde, confirma que en uno de los cromosomas 4 falta material del extremo terminal del brazo q. La citogentica de rutina y la FISH pueden usarse conjuntamente para diagnosticar con exactitud anomalas cromosmicas sutiles.
TIPOS DE SONDAS
SONDAS CENTROMRICAS (CEP)
TIPOS DE SONDAS
FISH CONVENCIONAL
Centromrico
Locus especfico
Pintado cromosmico
FISH
Ventajas: La resolucin es buena ( ~ 2mb). Puede ser aplicada a clulas en clulas en divisin como en no divisin. La tcnica es confiable. La hibridacin con mltiples sondas permite la deteccin de productos de translocacin. Puede identificar un rango de mutaciones. Monitoreo peridico o enfermedad residual en MO. Desventajas: No puede detectar pequeas mutaciones. Omite Uniparental disomas. Omite Inversiones. Sondas no estn comercialmente disponibles para todos las regiones cromosmicas.
SKY
Ventajas:
Mapeo de puntos de quiebre cromosmicos. Deteccin de translocaciones sutiles. Identificacin de cromosomas marcadores,
Desventajas:
con 1 slo cromosoma. Baja resolucin (mayor a 15 Mb ). Especfico, pero no como mtodo de screening.
CGH
Ventajas:
Requiere slo DNA genmico tumoral. Puede ser aplicado a tejidos frescos o
Desventajas:
Cromosopatas
Las cromosomopatas se clasifican en tres grandes grupos, sean estos:
Numricos Estructurales Mutaciones
Anomalas cromosmicas
Las anomalas cromosmicas mayores, pueden ser: prdida o copias extra. prdidas importantes de material gentico. fusiones, translocaciones, delecciones, inversiones detectables microscpicamente. En el Sndrome de Down se detecta una tercer copia del par 21 o trisoma 21. Mosaicos.
TRASTORNOS CROMOSOMICOS
Radiaciones ionizantes, sustancias qumicas.
Factores nutritivos, metablicos, toxinas,
ambientales. Reacciones de autoinmunidad. Edad materna. Pueden actuar durante el embarazo, sobre el propio embrin o sobre las clulas germinales de los individuos aptos para procrear.
Cromosomopatas numricas
trisomas somticas (Down), 1 cada 650 de los
recin nacidos trisoma 18 o sndrome de Edwards, 1 cada 5.000 recin nacidos; trisoma 13 o sndrome de Patau, 1 en 10.000 nacidos vivos sexuales (sndrome de Klinefelter). 47 XXY.1/1000 XYY, 1 cada 1.000 y 47 XXX, 1 cada 1.000 nias.
Cromosomopatas numricas
Uno de cada 400 a 500 recin nacidos vivos
presenta anormalidades de los Cromosomas sexuales. Monosomas o tetrasomas (son muy raras). La nica monosoma comprobada es la del sndrome de Turner, 45 XO cuya incidencia es de 1 cada 2000 nias nacidas vivas.
Cromosomopatas Estructurales
Deficiencia: cuando se pierde un extremo de cromosoma. Delecin: cuando lo que falta es el segmento intersticial
(intermedio). Inversin: cuando un fragmento se suelda invertido. Traslocacin: cuando un pedacito de un cromosoma no se suelda en ese cromosoma, sino en cualquier otro (otro par). Duplicacin de material: por ejemplo, que una pata de un cromosoma sea ms larga por duplicacin del material. Insercin.
Anomalas cromosmicas
Anomalas Cromosmicas
Inversin, un segmento del brazo q, del cromosoma 10 de la derecha est invertido. El cariotipo se escribe como 46,XY,inv(10)(q11.23q26.3).
Idiograma
46,XY,t(2;15)(p11.2;q11.2).
46,XY,+13,dic(13;14)(p11.2;p11.2)
46: el nmero total de cromosomas. Sigue siendo 46
porque los brazos largos de los cromosomas 13 y 14 se han fusionado en un cromosoma. XY: los cromosomas sexuales (varn). +13: indica la presencia de un cromosoma 13 adicional. dic(13;14): cromosoma dicntrico que implica a los cromosomas 13 y 14. Como en el caso de muchas translocaciones Robertsonianas, estn presentes los centrmeros de ambos cromosomas, de donde viene la designacin "dicntrico". (p11.2;p11.2): puntos de ruptura en los cromosomas 13 (p11.2), y 14 (p11.2) respectivamente.
Simbologa citogentica
1-22 # cromosomas X Cromosoma X Y Cromosoma Y p Brazo corto q Brazo largo + Ej. +21 --crom. 21 adicional. 13p+ -- duplicacin parcial de una regin.
Ej. -21 --crom. 21 de menos. 5p- --Perdida brazo p del crom #5. / Presencia de un mosaico. del Deleccin dup Duplicacin S Satlite
Translocacin = intercambio de fragmentos entre dos cromosomas no homlogos. Inv. Inversin = parte del cromosoma es cortado, girado 180 y es reinsertado en el cromosoma.
Ring chromosome
Anomalas cromosmicas
Otros cambios son tan sutiles que solo pueden ser
detectados por anlisis molecular, se llaman mutaciones. Muchas mutaciones estn involucradas en enfermedades como la fibrosis qustica, anemias de clulas falciformes, predisposiciones a ciertos cnceres, o a enfermedades psiquitricas mayores, entre otras.
Anomalas cromosmicas
Anomalas cromosmicas
Anomalas cromosmicas
Sndrome de Turner
(45,X) Es la nica monosoma
Machos frtiles
Desarrollo normal de gnadas y tamao
47,XXY
S. de Klinefelter
Sndrome Klinefelter
47, XXY Trisoma de los
cromosomas del sexo. Macho estril, los niveles de testosterona comienzan bajos y disminuyen con el tiempo. El pene reducido. Hipogonadismo
Anomalas cromosmicas
Anomalas cromosmicas
Anomalas cromosmicas
Sndrome Cri-du-chat
46, 5p Perdida de un fragmento del
brazo p del crom. #5 Retardo mental severa con IQ menor de 20 Craneo relativamente pequea Producen un sonido al llorar parecido al aullido de un gato; recin nacidos debido al poco desarrollo de las cuerdas vocales.
Sndrome Cri-du-chat
Anomalas cromosmicas
Anomalas cromosmicas
Sustitucin
Que hay una ria.
MUTACION Delecin
Insercin
Entre el clavel blanco y la rosa roja, su