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CITOGENETICA HUMANA

JULIO CESAR MARTINEZ LOZANO MSc, Esp.

CITOGENETICA

CITOGENETICA
Ciencia hbrida que intenta correlacionar

estructuras celulares (cromosomas) con fenmenos genticos.


Estudio de los cromosomas

de la clula, a nivel estructural y numrico.

CITOGENETICA

CITOGENETICA
Fundadores de la citogentica humana. Jrme Lejeune Klaus Patau

La Citogentica
Es el estudio, dentro del campo de la gentica, de los cromosomas, su estructura, su herencia y del lugar donde se encuentran

Citogentica Convencional

Citogentica Molecular

Bandas Q Bandas R Bandas G Bandas C Bandas NOR Bandeo de Alta Resolucin

FISH clsico
M-FISH SKY CGH

Banda Q

Mtodo Tincin con quinacrina

Caractersticas Bandas fluorescentes brillantes.

Tincin con Giemsa, luego de pre-tratamiento del cromosoma

Las bandas G oscuras corresponden a las Q brillantes Patrn inverso al de las Q y G, tiles para definir los extremos de los cromosomas. Resaltan las regiones telomricas.

Varias tcnicas

Varias tcnicas

Extraccin de DNA/protenas, tincin con Giemsa

Resaltan las regiones centromricas. Tien las regiones organizadoras del nuclolo (acrocntricos en el hombre)

NOR

Tincin con plata

CROMOSOMAS
Son estructuras complejas localizadas en el ncleo

de las clulas, compuestos por DNA, histonas y otras protenas, RNA y polisacridos.
Normalmente no se pueden ver con un

microscopio ptico, pero durante la divisin celular se condensan lo suficiente como para poder ser fcilmente analizados a 1.000 aumentos.

CROMOSOMAS
Generalidades: 23 pares. 22 autosmas 1 par sexual. Nmero total de cromosomas Genoma. Los cromosomas contienen aprox 35.000 genes, formados por 3 billones de pares de bases (tamao del genoma), cuya secuencia hace la diferencia entre los organismos.

Morfologa Cromosmica

Metacntrico (Cromosoma 1)

Submetacntrico (Cromosoma 9)

Acrocntrico (Cromosoma 14)

CARIOTIPO HUMANO
Anlisis cromosmico Es el conjunto de cromosomas de la especie Su determinacin se realiza observando durante la metafase la dotacin cromosmica de una clula. Uso: Identificar anomalas cromosmicas como causa de malformaciones o de enfermedad. Contar la cantidad de cromosomas Detectar cambios cromosmicos estructurales Los resultados pueden indicar cambios genticos asociados con una enfermedad.

CARIOTIPO HUMANO
Cuando esta indicado el examen. A una pareja con antecedentes de abortos. Evaluar la apariencia anormal del cuerpo que sugiere una anomala gentica. Diferentes tipos de leucemia. Defectos mltiples al momento del nacimiento. Presencia de genitales ambiguos.

CARIOTIPO HUMANO
Muestra: Sangre. Mdula sea.(biopsia de mdula sea) Lquido amnitico.(amniocentesis) Tejido placentario.(vellosidades corinicas, aborto espontneo )

Procedimiento
Recoleccin de la muestra y preparacin inicial.

Cultivo celular.
Inhibidor de la mitosis para detener las clulas en

metafase. Las clulas se seleccionan. (Sln fijadora) Los cromosomas se tien y se observan bajo el microscopio. Fotografa para obtener un cariotipo que muestre la disposicin de los cromosomas.

Microscopio Invertido

Botellas y Placas de Cultivo

CARIOTIPO HUMANO

Metafase 46,XX

Grupos que comprende el cariotipo humano:


- Cromosomas grandes

Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), meta y submetacntricos Grupo B, (cromosomas 4 y 5), submetacntricos - Cromosomas medianos Grupo C, (cromosomas 7, 8, 9, 10, 11, 12 y adems los cromosomas X), submetacntricos Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15) acrocntricos - Cromosomas pequeos Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18) submetacntricos Grupo F, (cromosomas 19 y 20) metacntricos Grupo G, (cromosomas 21 y 22) acrocntricos Por acuerdo los cromosomas sexuales X e Y se separan de sus grupos correspondientes y se ponen juntos aparte al final del cariotipo.

CARIOTIPO HUMANO

IDIOGRAMA representacin esquemtica del patrn de bandas G de un cariotipo

CARIOTIPO

Ventajas y desentajas de la Citogentica convencional

Ventajas 1- Permite ver al genoma entero en una sola vez. 2- Conveniente cuando se sospecha una anomala especfica (ejm. Ph en LMC) y como herramienta de Dx general para detectar el chr adicional. Anormalidades comnmente vistos en la progresin de la enfermedad de LMC Desventajas 1- Detecta anormalidades estructurales grandes
2- Necesita mucho trabajo y alta experiencia y habilidades por el operador
( una banda = 6Mb de DNA ~ 150 genes ).

Cariotipo de un linfocito

FISH
Qu es FISH?

FISH es una tcnica mixta de citogentica molecular que nos permite el diagnstico rpido de anomalas cromosmicas en metafase o interfase. Utiliza para ello una sonda de ADN marcado

FISH (fluorescence in situ hibridization)

FISH Metafase

Microdelecciones Material extra Reordenamientos

FISH Metafase
Clula en metafase que se ha hibridado con la sonda para el sndrome DiGeorge causado por una microdelecin en el cromosoma 22. La seal verde es un control interno situado en 22q13. Permite identificar rpidamente los dos cromosomas 22. La seal roja est situada en la regin DiGeorge, en 22q11.2. Puesto que ambos cromosomas 22 tienen la seal roja, en esta clula no hay microdelecin en la regin DiGeorge y este paciente no tendra el sndrome DiGeorge

FISH Interfase

Trisoma 21 El ncleo de la izquierda se ha hibridado con sondas para los cromosomas 13 (verde) y 21 (rojo), y tiene tres seales rojas.

El ncleo de la derecha se ha hibridado con sondas para los cromosomas 18 (azul claro), X (verde) e Y (rojo).

Hibridado con una sonda "de pintado" para el cromosoma 4, que fluoresce. Uno de los cromosomas 4 de este paciente era anormal, pero era difcil determinar con la citogentica de rutina si tena una pequea delecin terminal en 4q o si era el resultado de una reordenacin ms compleja. Puesto que ambos cromosomas 4 son fluorescentes en toda su longitud y no hay material fluorescente en ningn otro cromosoma, esto sugiere que la anomala es una delecin terminal pequea.

Esta metafase se ha hibridado con una sonda para la parte terminal del cromosoma 4q. La seal verde, confirma que en uno de los cromosomas 4 falta material del extremo terminal del brazo q. La citogentica de rutina y la FISH pueden usarse conjuntamente para diagnosticar con exactitud anomalas cromosmicas sutiles.

TIPOS DE SONDAS
SONDAS CENTROMRICAS (CEP)

SONDAS DE LOCUS ESPECFICO (LSI

SONDAS PAINTING (WCP)

SONDA TELOMRICA (TEL)

TIPOS DE SONDAS

FISH CONVENCIONAL
Centromrico

Locus especfico

Pintado cromosmico

FISH
Ventajas: La resolucin es buena ( ~ 2mb). Puede ser aplicada a clulas en clulas en divisin como en no divisin. La tcnica es confiable. La hibridacin con mltiples sondas permite la deteccin de productos de translocacin. Puede identificar un rango de mutaciones. Monitoreo peridico o enfermedad residual en MO. Desventajas: No puede detectar pequeas mutaciones. Omite Uniparental disomas. Omite Inversiones. Sondas no estn comercialmente disponibles para todos las regiones cromosmicas.

Cariotipacin espectral ( SKY)

SKY
Ventajas:
Mapeo de puntos de quiebre cromosmicos. Deteccin de translocaciones sutiles. Identificacin de cromosomas marcadores,

regiones homogneamente pintadas,y cromosomas doble minute Caracterizacin de rearreglos complejos.

Desventajas:

Equipos muy costosos. La tcnica es laboriosa. No se pueden detectar rearreglos cromosmicos

con 1 slo cromosoma. Baja resolucin (mayor a 15 Mb ). Especfico, pero no como mtodo de screening.

Hibridacin Genmica comparativa ( CGH)

CGH
Ventajas:
Requiere slo DNA genmico tumoral. Puede ser aplicado a tejidos frescos o

Desventajas:

congelados, lineas celulares, y muestras archivadas fijadas con formalina y parafinadas.

No puede detectar anormalidades

balanceadas. Copias de cambios cromosmicos < 10 mb. No son resueltos

Cromosopatas
Las cromosomopatas se clasifican en tres grandes grupos, sean estos:
Numricos Estructurales Mutaciones

Anomalas cromosmicas
Las anomalas cromosmicas mayores, pueden ser: prdida o copias extra. prdidas importantes de material gentico. fusiones, translocaciones, delecciones, inversiones detectables microscpicamente. En el Sndrome de Down se detecta una tercer copia del par 21 o trisoma 21. Mosaicos.

TRASTORNOS CROMOSOMICOS
Radiaciones ionizantes, sustancias qumicas.
Factores nutritivos, metablicos, toxinas,

ambientales. Reacciones de autoinmunidad. Edad materna. Pueden actuar durante el embarazo, sobre el propio embrin o sobre las clulas germinales de los individuos aptos para procrear.

Cromosomopatas numricas
trisomas somticas (Down), 1 cada 650 de los

recin nacidos trisoma 18 o sndrome de Edwards, 1 cada 5.000 recin nacidos; trisoma 13 o sndrome de Patau, 1 en 10.000 nacidos vivos sexuales (sndrome de Klinefelter). 47 XXY.1/1000 XYY, 1 cada 1.000 y 47 XXX, 1 cada 1.000 nias.

Cromosomopatas numricas
Uno de cada 400 a 500 recin nacidos vivos

presenta anormalidades de los Cromosomas sexuales. Monosomas o tetrasomas (son muy raras). La nica monosoma comprobada es la del sndrome de Turner, 45 XO cuya incidencia es de 1 cada 2000 nias nacidas vivas.

Cromosomopatas Estructurales
Deficiencia: cuando se pierde un extremo de cromosoma. Delecin: cuando lo que falta es el segmento intersticial

(intermedio). Inversin: cuando un fragmento se suelda invertido. Traslocacin: cuando un pedacito de un cromosoma no se suelda en ese cromosoma, sino en cualquier otro (otro par). Duplicacin de material: por ejemplo, que una pata de un cromosoma sea ms larga por duplicacin del material. Insercin.

Anomalas cromosmicas

Anomalas Cromosmicas

Inversin, un segmento del brazo q, del cromosoma 10 de la derecha est invertido. El cariotipo se escribe como 46,XY,inv(10)(q11.23q26.3).

Anomalas Cromosmicas Translocacin

Idiograma
46,XY,t(2;15)(p11.2;q11.2).

46,XY,+13,dic(13;14)(p11.2;p11.2)
46: el nmero total de cromosomas. Sigue siendo 46

porque los brazos largos de los cromosomas 13 y 14 se han fusionado en un cromosoma. XY: los cromosomas sexuales (varn). +13: indica la presencia de un cromosoma 13 adicional. dic(13;14): cromosoma dicntrico que implica a los cromosomas 13 y 14. Como en el caso de muchas translocaciones Robertsonianas, estn presentes los centrmeros de ambos cromosomas, de donde viene la designacin "dicntrico". (p11.2;p11.2): puntos de ruptura en los cromosomas 13 (p11.2), y 14 (p11.2) respectivamente.

Simbologa citogentica

1-22 # cromosomas X Cromosoma X Y Cromosoma Y p Brazo corto q Brazo largo + Ej. +21 --crom. 21 adicional. 13p+ -- duplicacin parcial de una regin.

Ej. -21 --crom. 21 de menos. 5p- --Perdida brazo p del crom #5. / Presencia de un mosaico. del Deleccin dup Duplicacin S Satlite

Translocacin = intercambio de fragmentos entre dos cromosomas no homlogos. Inv. Inversin = parte del cromosoma es cortado, girado 180 y es reinsertado en el cromosoma.

Isocromosoma = consiste de dos copias de un brazo y el otro es perdido. r Cromosoma de anillo


o Ring chromosome = terminales (telmeros) de los cromosomas se unen formando un cromosoma en forma de anillo.

Ring chromosome

Ejemplos de Frmulas Cariotpicas


46 , XX 46 , XY 45 , X 47 , XXY 47 , XX , +21 46 , XX / 47 , XX , +21 46 , XX , 5p47 , XY , +13 47 , XY , +18 normal normal Sndrome Turner Sndrome Klinefelter Sndrome Down
Mosaico (Sndrome Down)

Sndrome Cri-du-chat Sndrome de Patou Sndrome de Edwards

46, XY, -13, +T (13q . 21q) Translocacin (Sndrome Down)

Anomalas cromosmicas
Otros cambios son tan sutiles que solo pueden ser

detectados por anlisis molecular, se llaman mutaciones. Muchas mutaciones estn involucradas en enfermedades como la fibrosis qustica, anemias de clulas falciformes, predisposiciones a ciertos cnceres, o a enfermedades psiquitricas mayores, entre otras.

Anomalas cromosmicas

Anomalas cromosmicas

Anomalas cromosmicas

Sndrome de Turner
(45,X) Es la nica monosoma

completa compatible con la vida. (95% de tales casos terminan en aborto)


Incidencia en recin nacidos
Cultivo: Linfocitos de sangre perifrica Bandas: G Cariotipo: 45, X/46, X, r (X)

vivos es relativamente alta (1:5.000)


45,X/46,XX o las deleciones

parciales del cromosoma X.

Sndrome XYY Super Macho


47, XYY

Machos frtiles
Desarrollo normal de gnadas y tamao

testicular. Niveles altos de testosterona Mas altos de lo normal

Supermacho Trisomia sexual XYY

47,XXY

S. de Klinefelter

Sndrome Klinefelter
47, XXY Trisoma de los

cromosomas del sexo. Macho estril, los niveles de testosterona comienzan bajos y disminuyen con el tiempo. El pene reducido. Hipogonadismo

Anomalas cromosmicas

Anomalas cromosmicas

Anomalas cromosmicas

Sndrome Cri-du-chat
46, 5p Perdida de un fragmento del

brazo p del crom. #5 Retardo mental severa con IQ menor de 20 Craneo relativamente pequea Producen un sonido al llorar parecido al aullido de un gato; recin nacidos debido al poco desarrollo de las cuerdas vocales.

Sndrome Cri-du-chat

Anomalas cromosmicas

Anomalas cromosmicas

Sustitucin
Que hay una ria.

Que hay una nia El transcurrir de la vida es bello


El transcurrir de la vida es vello

MUTACION Delecin

Oro parece, plata no es.

Oro parece, pltano es.

Insercin
Entre el clavel blanco y la rosa roja, su

majestad escoja Entre el clavel blanco y la rosa roja, su majestad es coja.

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